本文關(guān)鍵詞：登革2型病毒NS2B_H-NS3蛋白酶復(fù)合物的原核表達及活性研究

  更多相關(guān)文章： 登革型病毒 NSBH-NSpro 原核表達 蛋白酶活性

【摘要】：目的通過原核表達獲得登革2型病毒NS2B_H-NS3pro重組蛋白,并對其蛋白酶活性進行初步研究。方法通過引入G4TG4連接臂,利用重疊PCR擴增登革2型病毒NS2B_H和NS3pro基因序列,構(gòu)建p ET-28b-NS2B_HG4TG4-NS3pro蛋白酶復(fù)合物原核表達載體,采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜MALDI-TOF-MS技術(shù)對純化后重組蛋白進行鑒定,FRET技術(shù)檢測其蛋白酶活性。結(jié)果成功構(gòu)建p ET-28b-NS2B_H-G4TG4-NS3pro原核表達載體,獲得與預(yù)期分子量大小相符且純度較高的可溶性蛋白,質(zhì)譜分析表明重組蛋白為登革2型病毒NS2B_HNS3pro蛋白酶復(fù)合物,具有較高的蛋白酶活性。結(jié)論基因工程技術(shù)獲得的NS2B_H-G4TG4-NS3pro重組蛋白為后續(xù)登革病毒蛋白酶適配體抑制劑的篩選奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科;廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院;廣州醫(yī)科大學(xué)金域檢驗學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 登革型病毒 NSBH-NSpro 原核表達 蛋白酶活性
【基金】：廣東省科技計劃項目(2013B0218003,2014A020212351) 廣州市屬高校重點學(xué)科建設(shè)經(jīng)費資助項目(穗教高教[2011]34號)
【分類號】：R373;R440
【正文快照】： 登革熱是由登革病毒(dengue virus,DV)引起的急性蟲媒傳染病,因氣候變暖、人口快速增長與交流增加、病毒流行株變化等因素,登革病毒感染已成為全球特別是熱帶和亞熱帶地區(qū)的重要傳染病之一。2014年廣州市爆發(fā)大規(guī)模登革熱疫情,全市共報告37 341例登革熱病例[1],給公共衛(wèi)生事業(yè)

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本文編號：950280