本文關(guān)鍵詞：IRE1-XBP1通路調(diào)控肝巨噬細(xì)胞極性的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： X盒結(jié)合蛋白 肝巨噬細(xì)胞 極性調(diào)節(jié)

【摘要】：目的分離、培養(yǎng)LEWIS大鼠肝臟肝巨噬細(xì)胞(KCs),觀(guān)察肌醇酶1-X盒連接蛋白1(IRE1-XBP1)通路活性改變對(duì)KCs功能的調(diào)控的作用機(jī)制。方法 (1)采取Ⅳ型膠原酶消化肝臟聯(lián)合非連續(xù)梯度離心法分離Lewis大鼠KCs;(2)鑒定后的KCs分為4組:XBP1沉默組(XBP1-shRNA組)、錯(cuò)義序列沉默對(duì)照組(Ctrl-shRNA組);Adv-XBP1過(guò)表達(dá)組(AdV-XBP1組)、錯(cuò)義序列過(guò)表達(dá)對(duì)照組(Ctrl-AdV組);(3)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)各組KCs中XBP1、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17轉(zhuǎn)錄水平;蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)JAK1、JAK2、STAT1及STAT3的蛋白表達(dá)水平;(4)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)及激光共聚焦檢測(cè)各組KCs表型的變化情況;(5)分離大鼠脾臟淋巴細(xì)胞,尼龍毛柱過(guò)濾純化T細(xì)胞,與上述各組KCs共培養(yǎng),Brdu滲入法檢測(cè)T細(xì)胞增殖情況;(6)Annexin V/PI法FCM觀(guān)察T淋巴細(xì)胞凋亡情況;(7)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)檢測(cè)上清液中IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17及IL-10水平。結(jié)果 (1)RT-PCR結(jié)果顯示,XBP1-shRNA組中XBP1的表達(dá)量較對(duì)照組顯著降低,而在A(yíng)dvXBP1組則明顯上調(diào)(P0.05);(2)FCM發(fā)現(xiàn),XBP1-shRNA組中MHC-Ⅱ、CD86、CD40的表達(dá)明顯低于對(duì)照組,而CD204和CD206的表達(dá)則顯著高于對(duì)照組;而在A(yíng)dv-XBP1組,則呈相反趨勢(shì);(3)Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)XBP1-shRNA組中JAK1、JAK2、STAT1和STAT3的蛋白表達(dá)及其磷酸化水平均受到抑制,而在A(yíng)dv-XBP1組則上述蛋白的表達(dá)及磷酸化水平得到顯著增強(qiáng);(4)Brdu發(fā)現(xiàn)抑制KCs中IRE1-XBP1活性后T細(xì)胞增殖受到明顯抑制,凋亡增加,促炎細(xì)胞因子分泌減少,抗炎細(xì)胞因子分泌增加(P0.05),而上調(diào)KCs中IRE1-XBP1活性后T細(xì)胞增殖則明顯增強(qiáng),凋亡明顯減少,促炎細(xì)胞因子分泌增加,抗炎細(xì)胞因子分泌減少(P0.05)。結(jié)論 KCs中IRE1-XBP1通路活性變化可以轉(zhuǎn)化KCs的極性狀態(tài),并通過(guò)調(diào)節(jié)JAK-STAT家族成員表達(dá),調(diào)控KCs自分泌細(xì)胞因子的組成成分;KCs中IRE1-XBP1通路活性變化可以影響共培養(yǎng)初始T淋巴細(xì)胞的增殖分化、凋亡及相關(guān)細(xì)胞因子的分泌。
【作者單位】： 重慶三峽中心醫(yī)院肝膽外科;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院肝膽外科;
【關(guān)鍵詞】： X盒結(jié)合蛋白 肝巨噬細(xì)胞 極性調(diào)節(jié)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81200329) 重慶市衛(wèi)生局項(xiàng)目(2013-2-168)
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 目前認(rèn)為,急性排斥反應(yīng)發(fā)生的實(shí)質(zhì)是持續(xù)的炎癥反應(yīng)及炎癥因子蓄積浸潤(rùn)。而抗原遞呈細(xì)胞是誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)及炎癥因子趨化的核心因素[1-2]。筆者前期發(fā)現(xiàn),作為肝血竇內(nèi)的固有巨噬細(xì)胞,也是機(jī)體最大的抗原遞呈細(xì)胞群的肝巨噬細(xì)胞(kupffer cells,KCs),活化后具有即可促進(jìn)急性排斥反

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本文編號(hào)：950467