本文關(guān)鍵詞：BC022687融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)、純化、抗體制備及特異性鑒定

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【摘要】：目的:構(gòu)建BC022687的原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)該質(zhì)粒在大腸桿菌中表達(dá)并純化其表達(dá)的融合蛋白,制備抗體并進(jìn)行特異性鑒定。方法:采用RT-PCR法從18-20g體重雄性小鼠睪丸組織中擴(kuò)增BC022687cDNA,經(jīng)TA克隆及亞克隆方法后定向連入原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a,將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL-21(DL3)上,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE分析,用考馬斯亮藍(lán)染色及Western blot分析鑒定后,利用鎳親和層析法純化表達(dá)融合蛋白,免疫新西蘭兔,制備多克隆抗體,以誘導(dǎo)表達(dá)的融合蛋白為樣本,Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗體的特異性。結(jié)果:測(cè)序結(jié)果證實(shí)成功擴(kuò)增出目的基因BC022687;酶切和測(cè)序結(jié)果證實(shí)pET-28a-BC022687原核表達(dá)載體構(gòu)建成功;SDS-PAGE電泳顯示表達(dá)出18.0kU的外源蛋白。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,表達(dá)出的蛋白為6×His tag的融合蛋白,而且Ni-NTA親和層析法純化該重組蛋白成功;將純化的融合蛋白免疫新西蘭兔,制備獲得了抗BC022687蛋白的多克隆抗體,鑒定實(shí)驗(yàn)顯示抗體特異性好。結(jié)論:已成功構(gòu)建、表達(dá)、純化了BC022687融合蛋白,以及成功制備了其特異性抗體,為研究BC022687蛋白在精子發(fā)生中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院;Dept.of
【關(guān)鍵詞】： BC蛋白 原核表達(dá) 蛋白純化 多克隆抗體 精子發(fā)生
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81300536,81172462) 湖北省自然科學(xué)基金(2013CFB331) 湖北省衛(wèi)生廳青年人才項(xiàng)目(WJ2015Q025,QJX2012-22) 武漢科技大學(xué)綠色制造與節(jié)能減排科技研究中心開(kāi)放基金(編號(hào):C129)
【分類(lèi)號(hào)】：R378.2
【正文快照】： 課題來(lái)源:國(guó)家自然科學(xué)基金(81300536;81172462);湖北省自然科學(xué)基金(2013CFB331);湖北省衛(wèi)生廳青年人才項(xiàng)目(WJ2015Q025;QJX2012-22);武漢科技大學(xué)綠色制造與節(jié)能減排科技研究中心開(kāi)放基金(編號(hào):C129)2 Dept.of ObstetricsGynecology,Virginia Commonwealth University,Rich

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊晶;三組治療艾滋病的靶向融合蛋白的基因工程研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

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本文編號(hào)：930435