本文關鍵詞：不同培養(yǎng)方法對體外誘導分化Th17細胞的影響

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【摘要】：目的 :Th17細胞缺乏特異性表面標記,難以分離純化活細胞,通過調(diào)整細胞因子濃度和不同培養(yǎng)方法 ,以獲得高純度Th17細胞亞群。方法:選用C57BL/6J小鼠脾臟獲得單個核細胞,磁珠分選獲得CD4+、CD44-Naive T細胞。建立不同Th17誘導培養(yǎng)體系,通過流式細胞術檢測獲得Th17細胞的比例,熒光定量PCR方法檢測ROR-γt、IL-17 m RNA表達水平,ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-17濃度,以尋找最佳培養(yǎng)條件。結(jié)果:TGF-β+IL-6+IL-23可誘導Th17細胞,但比例較低;加入TNF-α、IL-1β、anti-IFN-γ、anti-IL-2可進一步提高Th17比例,但后期培養(yǎng)呈衰減趨勢;使用U型96孔板培養(yǎng)Th17細胞明顯優(yōu)于24孔板培養(yǎng),細胞分化呈穩(wěn)定上升趨勢,培養(yǎng)第9天Th17細胞可達(91.85±1.05)%。IL-17、ROR-γt m RNA與Naive T細胞相比明顯上調(diào)(P0.001),IFN-γ、IL-4、Foxp3 m RNA表達量低(P0.001),細胞培養(yǎng)上清液中IL-17濃度明顯升高(P0.001)。結(jié)論:調(diào)整細胞因子誘導方案、縮小培養(yǎng)面積可不同程度提高Th17細胞誘導比率,且培養(yǎng)面積的影響作用更為顯著。
【作者單位】： 南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院消化科;
【關鍵詞】： Th細胞 Naive T細胞 體外誘導 細胞因子類
【基金】：國家自然科學基金(81170359)
【分類號】：R392
【正文快照】： [Acta Univ Med Nanjing,2016,36(03):335-339]淋巴細胞是適應性免疫系統(tǒng)的重要組成部分,其中CD4+T輔助細胞(T helper cells,Th)是介導特異性免疫反應的主要效應細胞。傳統(tǒng)認為,經(jīng)抗原刺激后,CD4+Th細胞分化為Th1、Th2細胞亞群[1-2],Th1亞群對胞內(nèi)病原體的清除至關重要,而Th2

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本文編號：930237