本文關(guān)鍵詞：不同培養(yǎng)方法對體外誘導(dǎo)分化Th17細(xì)胞的影響

  更多相關(guān)文章： Th細(xì)胞 Naive T細(xì)胞 體外誘導(dǎo) 細(xì)胞因子類

【摘要】：目的 :Th17細(xì)胞缺乏特異性表面標(biāo)記,難以分離純化活細(xì)胞,通過調(diào)整細(xì)胞因子濃度和不同培養(yǎng)方法 ,以獲得高純度Th17細(xì)胞亞群。方法:選用C57BL/6J小鼠脾臟獲得單個核細(xì)胞,磁珠分選獲得CD4+、CD44-Naive T細(xì)胞。建立不同Th17誘導(dǎo)培養(yǎng)體系,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測獲得Th17細(xì)胞的比例,熒光定量PCR方法檢測ROR-γt、IL-17 m RNA表達(dá)水平,ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-17濃度,以尋找最佳培養(yǎng)條件。結(jié)果:TGF-β+IL-6+IL-23可誘導(dǎo)Th17細(xì)胞,但比例較低;加入TNF-α、IL-1β、anti-IFN-γ、anti-IL-2可進(jìn)一步提高Th17比例,但后期培養(yǎng)呈衰減趨勢;使用U型96孔板培養(yǎng)Th17細(xì)胞明顯優(yōu)于24孔板培養(yǎng),細(xì)胞分化呈穩(wěn)定上升趨勢,培養(yǎng)第9天Th17細(xì)胞可達(dá)(91.85±1.05)%。IL-17、ROR-γt m RNA與Naive T細(xì)胞相比明顯上調(diào)(P0.001),IFN-γ、IL-4、Foxp3 m RNA表達(dá)量低(P0.001),細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-17濃度明顯升高(P0.001)。結(jié)論:調(diào)整細(xì)胞因子誘導(dǎo)方案、縮小培養(yǎng)面積可不同程度提高Th17細(xì)胞誘導(dǎo)比率,且培養(yǎng)面積的影響作用更為顯著。
【作者單位】： 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院消化科;
【關(guān)鍵詞】： Th細(xì)胞 Naive T細(xì)胞 體外誘導(dǎo) 細(xì)胞因子類
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81170359)
【分類號】：R392
【正文快照】： [Acta Univ Med Nanjing,2016,36(03):335-339]淋巴細(xì)胞是適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的重要組成部分,其中CD4+T輔助細(xì)胞(T helper cells,Th)是介導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)的主要效應(yīng)細(xì)胞。傳統(tǒng)認(rèn)為,經(jīng)抗原刺激后,CD4+Th細(xì)胞分化為Th1、Th2細(xì)胞亞群[1-2],Th1亞群對胞內(nèi)病原體的清除至關(guān)重要,而Th2

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本文編號：930237