本文關(guān)鍵詞：人NK細(xì)胞lncRNA表達(dá)分析及調(diào)控CD56的lncRNA研究

  更多相關(guān)文章： 自然殺傷細(xì)胞 長(zhǎng)鏈非編碼RNA CD56 分化 殺傷 細(xì)胞因子分泌

【摘要】：機(jī)體的固有免疫系統(tǒng)是由多種細(xì)胞所組成,這些細(xì)胞能形成快速免疫應(yīng)答,保護(hù)機(jī)體免受外界病原體的攻擊。自然殺傷細(xì)胞即NK細(xì)胞是一類具有細(xì)胞毒性的固有淋巴細(xì)胞,在機(jī)體抗病原體和抗腫瘤應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。NK細(xì)胞能釋放穿孔素和顆粒酶,并且NK細(xì)胞可以通過(guò)其表面表達(dá)的Fas-L與靶細(xì)胞表面表達(dá)的死亡受體Fas結(jié)合,誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡�；罨腘K細(xì)胞也能產(chǎn)生促炎性細(xì)胞因子如Y干擾素,進(jìn)一步促進(jìn)機(jī)體的固有和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。從傳統(tǒng)的NK細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)至今已有40多年歷史,關(guān)于NK細(xì)胞的發(fā)育和功能也有很多研究,但是是調(diào)控NK細(xì)胞發(fā)育、分化和功能的機(jī)制尚不清楚。“RNA世界假說(shuō)”認(rèn)為早期生命的基礎(chǔ)是RNA,然后RNA將遺傳信息轉(zhuǎn)交給更為穩(wěn)定的DNA,將催化功能轉(zhuǎn)交給更多樣且全能的蛋白質(zhì)。于是,盡管RNA在早期翻譯和剪接中發(fā)揮重要作用,但是其卻被大多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為只是基因和蛋白質(zhì)的中間體,即中心法則“DNA產(chǎn)生RNA產(chǎn)生蛋白”。然而,研究發(fā)現(xiàn)復(fù)雜有機(jī)體的基因組大部分被轉(zhuǎn)錄為RNA,并且發(fā)現(xiàn)了一類新型的發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的非編碼RNA (non-coding RNAs, ncRNAs).雖然現(xiàn)在大多數(shù)研究集中在較短的RNA上,越來(lái)越多的研究卻發(fā)現(xiàn)有一類較長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄本,它們不編碼蛋白,但能以RNA的形式發(fā)揮功能。盡管現(xiàn)在對(duì)這類轉(zhuǎn)錄本沒(méi)有一個(gè)公認(rèn)的分類,但long ncRNAs被認(rèn)為是一類長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的RNA分子,可能對(duì)細(xì)胞的發(fā)育、分化和功能發(fā)揮有重要調(diào)控作用。在本研究中,我們分離并純化了人早孕蛻膜NK(dNK)、外周血NK(pNK)、臍血NK細(xì)胞(cNK)和人外周血T細(xì)胞,以T細(xì)胞為對(duì)照,對(duì)這四種細(xì)胞進(jìn)行了人長(zhǎng)鏈非編碼RNA的芯片分析。我們?nèi)〉昧艘韵聨讉�(gè)方面的結(jié)果：1、我們分析了四種細(xì)胞分別高表達(dá)的lncRNA,發(fā)現(xiàn)它們具有各自不同的lncRNA表達(dá)譜,這也與之前認(rèn)為lncRNA的表達(dá)與蛋白相比具有更多細(xì)胞特異性的觀點(diǎn)相符,這些不同的lncRNA可能在細(xì)胞發(fā)育或功能中發(fā)揮直接或間接的調(diào)控作用。2、我們分析了三種NK細(xì)胞交叉表達(dá)的lncRNA,針對(duì)lncRNA的表達(dá)對(duì)三種細(xì)胞相關(guān)性進(jìn)行了分析,我們發(fā)現(xiàn)外周血NK細(xì)胞(pNK)和人臍帶血NK細(xì)胞(cNK)的相關(guān)性比較高,而早孕蛻膜NK(dNK)與它們相關(guān)性相對(duì)較低。這也與之前的觀點(diǎn)及本室之前的研究結(jié)果相符,即人外周血NK和臍帶血NK是表型相對(duì)較成熟的NK細(xì)胞,殺傷能力較強(qiáng)；而人蛻膜NK是表型相對(duì)較不成熟的NK細(xì)胞,殺傷能力較弱。3、由于lncRNA的功能反映于其作用的靶基因上,于是我們對(duì)lncRNA可能作用的靶基因進(jìn)行了聚類分析。根據(jù)NK細(xì)胞的主要功能,我們將靶基因分為三類：分化、殺傷、細(xì)胞因子分泌。分析發(fā)現(xiàn)可能調(diào)控這些靶基因的lncRNA在pNK和cNK中的表達(dá)相較于dNK中的表達(dá)有明顯差異,這也提供了另一種分子機(jī)制,即這些差異表達(dá)的lncRN A調(diào)控了靶基因的表達(dá),從而導(dǎo)致不同亞群NK細(xì)胞功能不同。4、最后我們對(duì)dNK細(xì)胞中高表達(dá)的一條lncRNA進(jìn)行了分析,這條lncRNA在dNK中高表達(dá),pNK和cNK表達(dá)次之,T細(xì)胞中幾乎不表達(dá)。由于其在基因組上的位置與CD56,即NK細(xì)胞上一個(gè)標(biāo)志性的表面分子相重疊,位于CD56的第一個(gè)內(nèi)含子區(qū),因此我們將其命名為lnc-CD56。研究發(fā)現(xiàn)將其敲低之后,CD56的表達(dá)也隨之下調(diào),表明其能調(diào)控CD56的表達(dá)。綜上,我們研究的創(chuàng)新之處在于首次對(duì)NK細(xì)胞進(jìn)行了lncRNA的芯片檢測(cè),并且對(duì)芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行了系統(tǒng)性的生物信息學(xué)分析,并根據(jù)靶基因進(jìn)行聚類分析,發(fā)現(xiàn)了一系列可能在NK細(xì)胞分化、行使殺傷功能或分泌細(xì)胞因子過(guò)程中發(fā)揮作用的lncRNA,為將來(lái)對(duì)NK細(xì)胞發(fā)育分化的分子機(jī)制研究提供了有用的數(shù)據(jù)資源。此外,我們還發(fā)現(xiàn)了一條能調(diào)控用于區(qū)分NK細(xì)胞的標(biāo)志性表面分子CD56的lncRNA,并將其命名為lnc-CD56,我們發(fā)現(xiàn)它能正向調(diào)控CD56的表達(dá),并可能促進(jìn)NK細(xì)胞的譜系發(fā)育,這可能為以后的NK細(xì)胞體外培養(yǎng)提供新的能更快更多獲得NK細(xì)胞的方法。
【關(guān)鍵詞】：自然殺傷細(xì)胞 長(zhǎng)鏈非編碼RNA CD56 分化 殺傷 細(xì)胞因子分泌
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-14
• 第1章 緒論(NK細(xì)胞發(fā)育及成熟的調(diào)控機(jī)制)14-29
• 1.1 NK細(xì)胞概述14-16
• 1.2 NK細(xì)胞發(fā)育分化過(guò)程中基因的調(diào)控16-20
• 1.2.1 NK細(xì)胞發(fā)育早期階段轉(zhuǎn)錄因子的作用16-17
• 1.2.2 NK細(xì)胞發(fā)育成熟階段轉(zhuǎn)錄因子的作用17-19
• 1.2.3 調(diào)控NK細(xì)胞效應(yīng)和記憶功能的因子19-20
• 1.3 microRNA在NK細(xì)胞發(fā)育分化中的作用20-22
• 1.3.1 調(diào)控效應(yīng)分子IFNγ、GZMB和PRF的miRNA20-21
• 1.3.2 調(diào)控NK細(xì)胞活化的miRNA21-22
• 1.3.3 調(diào)控NK細(xì)胞發(fā)育和成熟的miRNA22
• 1.4 長(zhǎng)鏈非編碼RNA對(duì)基因的調(diào)控22-29
• 1.4.1 長(zhǎng)鏈非編碼RNA概述22-23
• 1.4.2 長(zhǎng)鏈非編碼RNA對(duì)造血系統(tǒng)的調(diào)控23-29
• 參考文獻(xiàn)29-38
• 第2章 NK細(xì)胞長(zhǎng)鏈非編碼RNA表達(dá)譜分析38-78
• 2.1 引言38-39
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料儀器和方法39-56
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料39-45
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器45-46
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法46-56
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果56-75
• 2.3.1 人早孕蛻膜NK、新生兒臍帶血NK、外周血NK和外周血T細(xì)胞具有不同的lncRNA表達(dá)譜56-60
• 2.3.2 不同NK細(xì)胞亞群具有不同的lncRNA表達(dá)譜60-64
• 2.3.3 人NK細(xì)胞潛在的功能性lncRNA鑒定64-68
• 2.3.3.1 可能參與人NK細(xì)胞細(xì)胞毒性的lncRNA的鑒定64-66
• 2.3.3.2 可能參與人NK細(xì)胞細(xì)胞因子分泌的lncRNA的鑒定66-67
• 2.3.3.3 可能參與人NK細(xì)胞細(xì)胞分化的lncRNA的鑒定67-68
• 2.3.4 lnc-CD56在人NK細(xì)胞中高表達(dá)68-72
• 2.3.5 lnc-CD56能調(diào)控CD56的表達(dá)72-75
• 2.4 討論及總結(jié)75-78
• 參考文獻(xiàn)78-82
• 致謝82-83
• 碩士在讀期間取得的研究成果83

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本文編號(hào)：791220