本文關(guān)鍵詞：抗體偶聯(lián)藥物抗HER2單抗-MCC-DM1質(zhì)控方法的建立

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【摘要】：目的:建立抗體偶聯(lián)藥物(ADC)抗人表皮生長因子受體-2(HER2)單抗-馬來酰亞胺基-環(huán)己烷-1-羧化物(MCC)-美登素衍生物(DM1)(trastuzumab-DM1,T-DM1)的質(zhì)控方法。方法:利用人乳腺癌BT-474細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)測定T-DM1的生物學(xué)活性;利用生物分子間相互作用分析核心技術(shù)(biomolecular interaction analysis core-technology,BIAcore)測定其結(jié)合常數(shù)(KD);利用HER2抗原和抗DM1抗體雙夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)對T-DM1進(jìn)行鑒別;利用液質(zhì)聯(lián)用法和紫外分光光度法測定藥物抗體偶聯(lián)比(DAR);利用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定游離藥物DM1的含量;利用十二烷基磺酸鈉-毛細(xì)管凝膠電泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)和分子排阻色譜(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC)分析純度;利用成像毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦電泳(i CIEF)分析電荷異質(zhì)性,其他各項(xiàng)指標(biāo)均符合現(xiàn)行版中國藥典的要求及其他相關(guān)要求。結(jié)果:T-DM1生物學(xué)活性相對效價(jià)為(94.04±2.60)%,KD為(1.03±0.02)E-9 mol·L-1,RSD均小于5%;ELISA鑒別為陽性;液質(zhì)聯(lián)用法和紫外分光光度法測得的DAR分別為3.21及3.25;RP-HPLC法測定游離藥物DM1的含量為(0.822 2±0.050 5)%,RSD小于10%;非還原CE-SDS主峰面積為(96.63±0.07)%,RSD為0.07%;SE-HPLC主峰面積為(97.65±0.005 8)%,RSD為0.005 8%;i CIEF分析可以將每個(gè)偶聯(lián)數(shù)的抗體藥物分開,達(dá)到很好的鑒別。結(jié)論:建立ADC中T-DM1質(zhì)控方法具有保證產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的特點(diǎn),為我國ADC的質(zhì)量檢測提供了參考依據(jù)。
【作者單位】： 中國食品藥品檢定研究院單克隆抗體產(chǎn)品室衛(wèi)生部生物技術(shù)產(chǎn)品檢定方法及其標(biāo)準(zhǔn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 抗體偶聯(lián)藥物(ADC) 抗HER單抗-MCC-DM(T-DM) 曲妥珠單抗 美登素 藥物抗體偶聯(lián)比 生物學(xué)活性 酶聯(lián)免疫(ELISA) 鑒別 純度測定
【基金】：國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)資助項(xiàng)目(No.2014ZX09304311-001,No.2012ZX09304010) 中國食品藥品檢定研究院學(xué)科帶頭人培養(yǎng)基金課題(2013X3)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 利用抗體實(shí)現(xiàn)細(xì)胞毒性藥物靶向治療的觀念胞因有絲分裂障礙而死亡的化合物,機(jī)制和長春堿可追溯到20世紀(jì)初[1]。近年來,隨著基因工程技類藥物相同,但活性是后者的20~100倍[12-13]。術(shù)、抗體制備技術(shù)的成熟,以及新型化學(xué)連接技術(shù)的T-DM1既保留了曲妥珠單抗依賴性的細(xì)胞增殖抑出

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本文編號：757849