目的:研究中波紫外線(UVB)對(duì)IFN-γ體外誘導(dǎo)的正常人角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)表面抗原表達(dá)的影響及可能機(jī)制。方法:分離培養(yǎng)原代人KC,用適當(dāng)濃度的IFN-γ對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,再用生理劑量的UVB照射細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)測定照射前后細(xì)胞表面CD40、CD54、MHC-II的表達(dá),放射免疫法測定照射前后細(xì)胞上清液中α-MSH濃度,ELISA測定上清液中IL-6、IL-8、TNF-α等細(xì)胞因子濃度。結(jié)果:KC低水平表達(dá)CD40、CD54、MHC-II抗原,IFN-γ處理后,細(xì)胞活性增強(qiáng),表面抗原的表達(dá)顯著增加,再用UVB照射后,細(xì)胞活性下降,表面抗原表達(dá)明顯下調(diào),而上清液中α-MSH的濃度則逐漸上升,照后72 h達(dá)最高峰。KC經(jīng)可溶性CD40配體(sCD40L)處理后,IL-8的釋放和CD54的表達(dá)加強(qiáng)。結(jié)論:UVB能抑制IFN-γ誘導(dǎo)的KC表面抗原的表達(dá),這可能與UVB誘導(dǎo)KC自分泌產(chǎn)生α-MSH等免疫抑制物有關(guān)。

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圖2各處理組的角質(zhì)形成細(xì)胞活性(MTT法)

單用IFN-γ處理KC72h后,其活性較對(duì)照組明顯增強(qiáng)(P<0.05);30mJ/cm2UVB處理細(xì)胞24h后,細(xì)胞活性較空白對(duì)照組略低;而IFN-γ處理72h再用UVB處理細(xì)胞24h后,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞活性急劇下降,A值從4.02降至1.31,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0....

圖11a:為正常人角質(zhì)形成細(xì)胞形態(tài);1b:為IFN-γ刺激72h后的角質(zhì)形成細(xì)胞形態(tài);1c:為IFN-γ刺激72h后再用30mJ/cm2UVB處理24h后的角質(zhì)形成細(xì)胞形態(tài)

細(xì)胞呈鵝卵石狀,表面光滑,少數(shù)細(xì)胞可見微小突起。IFN-γ處理72h后,細(xì)胞密度增高,大部分細(xì)胞表面可出現(xiàn)微小突起。棄去含IFN-γ的培養(yǎng)基,再用30mJ/cm2UVB處理該細(xì)胞24h后發(fā)現(xiàn),細(xì)胞逐漸恢復(fù)初始形態(tài),細(xì)胞密度降低(圖1)。2.2MTT測定結(jié)果

圖3各處理組細(xì)胞表面CD40、CD54的流式測定結(jié)果

表2各處理組KCIL-8、TNF-α及IL-6的分泌情況(xˉ±s)pg/mLIL-8TNF-αIL-6對(duì)照組109.50±24.7521.74±4.1215.63±1.98IFN-γ組1265.00±34.351)28.37±0.7715.6....

圖4各處理組α-MSH濃度變化

圖3各處理組細(xì)胞表面CD40、CD54的流式測定結(jié)果3討論

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