發(fā)布時(shí)間：2017-08-16 09:42

  本文關(guān)鍵詞：細(xì)粒棘球絳蟲原頭節(jié)抗原分子Eg-01883的克隆、表達(dá)及免疫原性分析

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【摘要】：目的篩選細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)抗原分子Eg-01883,并進(jìn)行克隆、表達(dá)及免疫原性分析,為尋找棘球蚴病特異性診斷抗原提供依據(jù)。方法分析已發(fā)表的細(xì)粒棘球絳蟲mRNA測(cè)序數(shù)據(jù),篩選六鉤蚴中不表達(dá)、原頭節(jié)中高表達(dá)的抗原分子Eg-01883。提取細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)總RNA,用RT-PCR對(duì)目的基因Eg-01883進(jìn)行克隆,重組構(gòu)建原核表達(dá)載體p ET28a-Eg-01883,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)并純化目的重組蛋白r Eg-01883。ICR小鼠隨機(jī)分為3組(每組12只),免疫組小鼠的背部皮下多點(diǎn)注射r Eg-01883,2周后加強(qiáng)免疫1次(劑量均為10μg,100μl/只);佐劑組注射福氏佐劑和PBS,空白對(duì)照組不作任何處理。分別于免疫前,首次免疫后1、2、4周每組小鼠尾靜脈采血,免疫后6周進(jìn)行去眼球采血。用ELISA檢測(cè)3組小鼠免疫后不同時(shí)間點(diǎn)的血清特異性Ig G抗體水平,及細(xì)胞因子白介素4(IL-4)和γ干擾素(IFN-γ)水平。蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析重組蛋白r Eg-01883的免疫原性。結(jié)果篩選出在細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)中高表達(dá)的抗原分子Eg-01883,克隆、表達(dá)和純化后獲得重組蛋白r Eg-01883,該蛋白主要以包涵體形式存在。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,用純化后的重組蛋白r Eg-01883免疫小鼠,可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性Ig G抗體,免疫組小鼠的血清Ig G抗體水平自首次免疫后1周開始上升,6周時(shí)達(dá)到最高水平(2.344±0.153),顯著高于佐劑組(0.206 1±0.006)和空白對(duì)照組(0.241±0.01)(P0.01)。首次免疫后6周,血清中的細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4水平,免疫組分別為43.23 pg/ml和24.88 pg/ml,均顯著高于佐劑組(21.77 pg/ml,13.27 pg/ml)和空白對(duì)照組(17.40 pg/ml,12.25 pg/ml)(P0.05)。Western blotting分析結(jié)果顯示,該重組蛋白r Eg-01883抗原可被His-Tag標(biāo)簽抗體、免疫組小鼠血清、原頭節(jié)繼發(fā)感染的小鼠血清識(shí)別。結(jié)論篩選獲得細(xì)粒棘球絳蟲原頭節(jié)中高表達(dá)的抗原分子Eg-01883,克隆、表達(dá)、純化后的重組蛋白r Eg-01883免疫ICR小鼠具有較好的免疫原性。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;寧夏醫(yī)科大學(xué)包蟲病實(shí)驗(yàn)室;寧夏醫(yī)科大學(xué)科技中心;寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原與免疫教研室;寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床學(xué)院檢驗(yàn)系;寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院遺傳與細(xì)胞生物教研室;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)粒棘球絳蟲 原頭節(jié) 重組蛋白rEg- 原核表達(dá) 免疫原性
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(NO.81360249)~~
【分類號(hào)】：R383.3
【正文快照】： (Ningxia Medical University,1 Institute of Basic Medical College;2 Echinococcosis Laboratory;3 TheSci-technology Center;4 Department of Pathogenic Biology and Medical Immunology,School of BasicMedicine;5 Department of Laboratory;6 Medical Genetics and Ce

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9 李s，

本文編號(hào)：682606