本文關(guān)鍵詞：早、晚代MEF用于人胚胎干細胞培養(yǎng)的能力差異及分泌機制

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【摘要】：目的比較早、晚代小鼠胚胎成纖維細胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEF)維持人胚胎干細胞(Humanembryonic stem cells,h ESCs)正常生長的能力差異,并從分泌因子角度探討其機制,為開發(fā)基于晚代MEF的h ESCs培養(yǎng)體系奠定基礎(chǔ)。方法以P3或P9代MEF為飼養(yǎng)層培養(yǎng)h ESCs;通過添加堿性成纖維細胞生長因子(Basic fibroblastgrowth factor,b FGF)調(diào)節(jié)MEF分泌因子表達;用β-半乳糖苷酶活性染色檢測細胞衰老;用定量RT-PCR檢測基因的m RNA表達水平;用ELISA檢測TNF-a的分泌量。結(jié)果 P3代MEF增殖較快,能維持h ESCs正常增殖,而P9代MEF呈現(xiàn)衰老表型,不能維持h ESCs正常增殖。P9代MEF表達多種分泌因子(Grem1、Tgfb1、Inhba、Bmp4和Tgfb2)及衰老相關(guān)分泌表型(Senescence-associated secretory phenotype,SASP)因子(Il-1a和Tnfa)的水平均明顯高于P3代MEF。加入b FGF后,P3和P9代MEF的Grem1、Tgfb1和Inhba的表達均明顯升高,而Bmp4和Tgfb2表達均下降。結(jié)論 P9代MEF保留對b FGF的反應(yīng)性,但有明顯衰老表型及SASP,SASP的出現(xiàn)可能是P9代MEF不能維持h ESCs正常生長的重要原因。
【作者單位】： 廣東醫(yī)學(xué)院東莞科研中心衰老研究所;廣東醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)院;廣東醫(yī)學(xué)院第二臨床學(xué)院;東莞市人民醫(yī)院整形美容科;廣東省醫(yī)學(xué)分子診斷重點實驗室;廣東醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)院;廣東醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 胚胎干細胞 堿性成纖維細胞生長因子 小鼠胚胎成纖維細胞 細胞衰老 分泌
【基金】：廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項目(No.A2012420) 東莞市社會科技發(fā)展項目(No.2014108101047) 廣東醫(yī)學(xué)院博士啟動基金(No.B2011005) 大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項目(No.LYDC001,1057114018)資助
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 1998年,美國科學(xué)家Thomson從人囊胚內(nèi)細胞團中分離出人胚胎干細胞(Human embryonic stem cells,h ESCs),并建立了人胚胎干細胞系[1]。h ESCs屬于多潛能干細胞,具有無限增殖能力,并可分化為體內(nèi)任何類型的細胞,是再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域最重要的種子細胞之一[1-4]。h ESCs體外培養(yǎng)須滿足

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本文編號：663168