本文關(guān)鍵詞：人噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建及人源性IL-17單鏈抗體的篩選

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【摘要】：目的通過(guò)噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建人源單鏈抗體庫(kù),篩選抗IL-17的特異性抗體并鑒定。方法通過(guò)采集35位類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的外周血淋巴細(xì)胞,提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA,PCR擴(kuò)增人H鏈和L鏈可變區(qū)抗體基因。利用SOE-PCR法將VH和VL片段拼接成Sc Fv片段并插入噬菌體載體p CANTAB5E中,構(gòu)建人源噬菌體單鏈抗體庫(kù)。通過(guò)固相化的抗原對(duì)抗體庫(kù)進(jìn)行3輪篩選后,挑取單克隆進(jìn)行phage-ELISA鑒定,篩選與抗原具有較強(qiáng)結(jié)合性的噬菌體克隆。結(jié)果成功構(gòu)建庫(kù)容為3.5×10~8的噬菌體抗體庫(kù),從中篩選到5株陽(yáng)性克隆,ELISA證實(shí)其對(duì)抗原IL-17具有較強(qiáng)的結(jié)合性及中和活性。結(jié)論成功構(gòu)建了人源噬菌體單鏈抗體庫(kù),從中獲得具有抗IL-17的人源Sc Fv抗體片段,為進(jìn)一步的研究和應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院深圳市第二人民醫(yī)院;中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院抗體藥物研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 白細(xì)胞介素- 噬菌體展示抗體庫(kù) 單鏈抗體 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎
【基金】：深圳市科技創(chuàng)新基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(深科技創(chuàng)新[2013]171號(hào))
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 人白細(xì)胞介素-17(IL-17)是一種很強(qiáng)的促炎癥細(xì)胞因子,可以通過(guò)增強(qiáng)促炎細(xì)胞因子釋放來(lái)放大炎癥反應(yīng),其在自身免疫病等疾病病理過(guò)程中的作用已引起了醫(yī)學(xué)界廣泛的關(guān)注,在鼠模型及人類(lèi)患者的研究中都表明IL-17在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中有重要作用,在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型中,利用

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