本文關(guān)鍵詞：微環(huán)DNA誘導(dǎo)表達(dá)方法的優(yōu)化和體內(nèi)表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 微環(huán)質(zhì)粒 誘導(dǎo)表達(dá) 活體成像

【摘要】：目的通過(guò)對(duì)微環(huán)DNA的表達(dá)步驟進(jìn)行優(yōu)化來(lái)提高微環(huán)DNA的誘導(dǎo)表達(dá)量以及降低誘導(dǎo)表達(dá)后的母環(huán)污染,并利用微環(huán)DNA構(gòu)建一個(gè)能進(jìn)行體內(nèi)活體成像的表達(dá)系統(tǒng)。方法通過(guò)改變誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入L-阿拉伯糖的次數(shù)以及改變培養(yǎng)時(shí)間來(lái)提高DNA表達(dá)量、降低母環(huán)污染。通過(guò)Furin和2A將靶基因和螢火蟲素酶基因(luciferase)連接到微環(huán)DNA中,再利用高壓水流動(dòng)力學(xué)注射的方法使目的基因在小鼠體內(nèi)表達(dá),通過(guò)活體成像檢測(cè)螢火蟲素酶的表達(dá)信號(hào)來(lái)監(jiān)控和檢測(cè)目的基因的表達(dá)。結(jié)果成功提高了微環(huán)DNA的表達(dá)量,降低了質(zhì)粒的母環(huán)污染,建立可通過(guò)活體成像系統(tǒng)鑒定靶基因表達(dá)的系統(tǒng)。結(jié)論通過(guò)對(duì)微環(huán)DNA表達(dá)過(guò)程的優(yōu)化大大提高了DNA的表達(dá)量,并且可以通過(guò)構(gòu)建的微環(huán)DNA系統(tǒng)來(lái)監(jiān)測(cè)靶基因在體內(nèi)的表達(dá)情況。
【作者單位】： 蘇州大學(xué)造血干細(xì)胞移植研究所腫瘤細(xì)胞與分子免疫實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 微環(huán)質(zhì)粒 誘導(dǎo)表達(dá) 活體成像
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 微環(huán)DNA是近年研究出的一種新型載體,是傳統(tǒng)質(zhì)粒在大腸桿菌中通過(guò)特異性的基因位點(diǎn)重組得到的一種小環(huán)超螺旋DNA[1]。微環(huán)DNA不含有抗生素抗性標(biāo)記或細(xì)菌的復(fù)制起點(diǎn),這種小的載體可以在體內(nèi)或體外長(zhǎng)時(shí)間的表達(dá)轉(zhuǎn)基因[2-3],并且不像其他標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒由于含有細(xì)菌的DNA骨架而引起免

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