本文關(guān)鍵詞：乳酸桿菌對(duì)細(xì)胞因子及TLR-NF-κB途徑的調(diào)節(jié)作用研究

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【摘要】：乳酸菌作為益生菌,可以通過(guò)對(duì)抗炎因子和促炎因子的調(diào)節(jié)發(fā)揮抗腸炎作用,研究表明,不同乳酸菌對(duì)不同細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用存在種屬性差異。近幾年,乳酸桿菌對(duì)致病菌S.sonnei刺激HT-29細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用及其作用機(jī)制的研究較少,所以本實(shí)驗(yàn)以S.sonnei作為炎癥刺激,研究乳酸桿菌與HT-29細(xì)胞中TLR-NF-κB信號(hào)途徑的相關(guān)性。采用ELISA法研究副干酪乳桿菌副干酪亞種M5、干酪乳桿菌Q8和鼠李糖乳桿菌J10對(duì)HT-29產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子白介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和IL-12等的調(diào)節(jié)作用。采用免疫熒光技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)研究了三種乳酸桿菌M5-L、Q8-L和J10-L對(duì)HT-29細(xì)胞中TLR-NF-κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,只加S.sonnei的陽(yáng)性對(duì)照組中,IL-1β分泌量為156.3pg/m L,而M5-L、Q8-L和J10-L的預(yù)防組中,IL-1β的分泌量分別為118.9pg/m L、80.0 pg/m L和104.9 pg/m L,說(shuō)明三種乳酸桿菌對(duì)炎性因子IL-1β均有顯著的抑制。IL-8的分泌量在只加S.sonnei的陽(yáng)性對(duì)照組中,為1096.0pg/m L,而M5-L、Q8-L和J10-L的預(yù)防組中,IL-8的分泌量分別為112.7 pg/m L、290.9 pg/m L和213.0 pg/m L,說(shuō)明三種乳酸桿菌對(duì)炎性因子IL-8的分泌均也有顯著的抑制。對(duì)TNF-α的檢測(cè)結(jié)果顯示,三種乳酸桿菌可以促進(jìn)HT-29細(xì)胞中TNF-α的分泌,但分泌量較少。對(duì)IL-10的檢測(cè)結(jié)果顯示,M5-L和J10-L能顯著促進(jìn)抗炎因子IL-10的分泌。對(duì)炎性因子IL-6和IL-12的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),HT-29細(xì)胞本身不能產(chǎn)生IL-6和IL-12,且S.sonnei也不能刺激HT-29細(xì)胞產(chǎn)生這兩種炎性因子。用熒光定量PCR法,對(duì)IL-8的m RNA進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示M5-L、Q8-L和J10-L均能顯著降低IL-8的m RNA表達(dá),表明三種乳酸桿菌不僅能抑制炎性因子IL-8的分泌,而且也能抑制其m RNA表達(dá)。免疫熒光技術(shù)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),致病菌S.sonnei能促進(jìn)NF-κB發(fā)生核轉(zhuǎn)位,從而促進(jìn)炎性因子IL-8的產(chǎn)生,三種乳酸桿菌對(duì)NF-κB的核轉(zhuǎn)位有一定的抑制作用,但不能完全抑制。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明,致病菌S.sonnei能刺激誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞上TLR4表達(dá)的提高,三種乳酸桿菌均能抑制S.sonnei刺激導(dǎo)致的HT-29細(xì)胞上TLR4表達(dá)的提高,從而抑制TLR4介導(dǎo)的信號(hào)通路。
【關(guān)鍵詞】：乳酸桿菌 細(xì)胞因子 TLR-NF-κB信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R371
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第1章 緒論10-18
• 1.1 課題研究背景及目的意義10-11
• 1.2 乳酸菌菌體對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用研究11-12
• 1.2.1 乳酸菌活菌體對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用11-12
• 1.2.2 乳酸菌死菌體對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用12
• 1.3 乳酸菌的胞外代謝物對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用研究12-14
• 1.3.1 乳酸菌的胞外多肽對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用12-13
• 1.3.2 乳酸菌的代謝物乳酸對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用13-14
• 1.3.3 乳酸菌的活性產(chǎn)物—耐消化酶對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用14
• 1.4 乳酸菌DNA對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用研究14-15
• 1.5 乳酸菌表面成分對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用研究15-16
• 1.5.1 乳酸菌多磷酸鹽對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用研究15
• 1.5.2 乳酸菌S層蛋白對(duì)腸道炎癥的調(diào)控作用研究15-16
• 1.6 本課題主要研究?jī)?nèi)容16-18
• 1.6.1 本課題的技術(shù)路線16
• 1.6.2 本課題的研究?jī)?nèi)容16-18
• 第2章 材料和方法18-29
• 2.1 材料及儀器18-21
• 2.1.1 材料與試劑18-19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器19-20
• 2.1.3 培養(yǎng)基20-21
• 2.1.4 菌種和細(xì)胞21
• 2.2 乳酸桿菌和致病菌的菌落計(jì)數(shù)21-22
• 2.2.1 乳酸菌的菌落計(jì)數(shù)21-22
• 2.2.2 致病菌的菌落計(jì)數(shù)22
• 2.3 乳酸桿菌及致病菌S. sonnei對(duì)HT-29 細(xì)胞的干預(yù)處理22-23
• 2.3.1 細(xì)胞處理22
• 2.3.2 干預(yù)處理22-23
• 2.4 NO試劑盒測(cè)HT-29 細(xì)胞上清液中NO含量23
• 2.5 ELISA法檢測(cè)HT-29 細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子含量23-24
• 2.6 熒光定量PCR測(cè)定炎性因子IL-8 的m RNA表達(dá)量24-27
• 2.7 TLR-NF-κB信號(hào)通路的檢測(cè)27-28
• 2.7.1 免疫熒光法觀察NF-κB蛋白的核轉(zhuǎn)位27
• 2.7.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HT-29 細(xì)胞上TLR4 的表達(dá)27-28
• 2.8 數(shù)據(jù)處理及繪圖28-29
• 第3章 乳酸桿菌對(duì)NO及IL-10 和TNF-α 調(diào)節(jié)作用研究29-39
• 3.1 乳酸桿菌和致病菌的菌落計(jì)數(shù)29-30
• 3.2 HT-29 細(xì)胞上清液中NO含量的變化30-32
• 3.3 HT-29 細(xì)胞上清液中抗炎因子IL-10 含量的變化32-35
• 3.4 HT-29 細(xì)胞上清液中細(xì)胞因子TNF-α 含量的變化35-38
• 3.5 本章小結(jié)38-39
• 第4章 乳酸桿菌對(duì)炎性因子的調(diào)節(jié)作用研究39-54
• 4.1 乳酸桿菌對(duì)S. sonnei刺激HT-29 細(xì)胞分泌IL-1β 的調(diào)節(jié)39-42
• 4.2 乳酸桿菌對(duì)S. sonnei刺激HT-29 細(xì)胞分泌IL-8 的調(diào)節(jié)42-45
• 4.3 乳酸桿菌對(duì)炎性因子IL-6 和IL-12 的調(diào)節(jié)45-49
• 4.4 乳酸桿菌對(duì)HT-29 細(xì)胞產(chǎn)生IL-8 的m RNA表達(dá)的調(diào)節(jié)49-52
• 4.4.1 RNA質(zhì)量及引物特異性鑒定49-50
• 4.4.2 乳酸桿菌對(duì)IL-8 的mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)50-52
• 4.5 本章小結(jié)52-54
• 第5章 乳酸桿菌對(duì)TLR-NF-κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用54-61
• 5.1 乳酸桿菌對(duì)HT-29 細(xì)胞中NF-κB p65 核轉(zhuǎn)位的調(diào)節(jié)54-58
• 5.2 乳酸桿菌對(duì)HT-29 細(xì)胞上TLR4 表達(dá)的調(diào)節(jié)58-60
• 5.3 本章小結(jié)60-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-69
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文69-71
• 致謝71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陳曦;歐陽(yáng)欽;;HT-29細(xì)胞Toll通路相關(guān)分子表達(dá)與調(diào)控的研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年04期

2 Sahar K Hegazy;Mohamed M El-Bedewy;;Effect of probiotics on pro-inflammatory cytokines and NF-κB activation in ulcerative colitis[J];World Journal of Gastroenterology;2010年33期

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本文編號(hào)：636743