鮑曼不動桿菌外膜蛋白W的克隆表達及純化
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【摘要】:目的通過基因克隆方法制備鮑曼不動桿菌外膜蛋白W(outer membrane protein W,OmpW),為研究其生物學(xué)活性及耐藥機制奠定實驗基礎(chǔ)。方法通過PCR方法擴增鮑曼不動桿菌臨床株A1株的外膜蛋白W基因(OmpW),構(gòu)建原核表達載體pET30a/ompW,采用PCR方法和測序鑒定擴增產(chǎn)物。篩選陽性表達載體后轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌表達宿主菌BL21中,IPTG誘導(dǎo)表達重組蛋白并進行純化。結(jié)果 pET30a/ompW原核表達重組載體構(gòu)建成功,基因測序鑒定,其在原核表達系統(tǒng)中高表達,表達產(chǎn)物分子質(zhì)量單位約為43ku,與預(yù)期值相符。表達產(chǎn)物經(jīng)8mol/L尿素和Tris-HCl處理純化,得到高純度的重組OmpW蛋白。結(jié)論成功構(gòu)建鮑曼不動桿菌OmpW蛋白基因重組原核表達系統(tǒng),并獲得高純度的重組OmpW蛋白,為研究鮑曼不動桿菌外膜蛋白W的生物學(xué)活性以及耐藥機制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】: 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科;內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)實驗室;
【關(guān)鍵詞】: 鮑曼不動桿菌 外膜蛋白W 表達純化
【基金】:內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項目(No.2013MS1127)
【分類號】:R378.2
【正文快照】: ***鮑曼不動桿菌是一種革蘭陰性桿菌,屬于條件致病菌,現(xiàn)已成為全球性新型的院內(nèi)感染病原體,可引起肺炎、腦膜炎、菌血癥以及軟組織感染等[1-2]。流行病學(xué)調(diào)查顯示,醫(yī)院鮑曼不動桿菌分離率居高不下,耐多重抗生素鮑曼不動桿菌菌株數(shù)量急劇增多[3-5],且有耐受各種抗生素的傾向,其
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,本文編號:636321
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