本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌肝素結(jié)合血凝黏附素的原核表達及其在結(jié)核病血清學(xué)診斷中的應(yīng)用

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【摘要】：目的原核表達與純化結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)肝素結(jié)合血凝黏附素(heparin-binding haemagglutinin adhesion,HBHA),并初步評估其在結(jié)核病血清學(xué)診斷中的價值。方法采用PCR法從M.tb H37Rv基因組中擴增hbha基因,克隆至原核表達載體p ET-28a(+),構(gòu)建重組表達質(zhì)粒p ET-28ah,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達。表達的重組HBHA(r HBHA)蛋白經(jīng)Ni2+親和層析柱純化后,Western blot法分析其抗原特異性。收集71例確診的結(jié)核病患者和30名健康體檢者血清,采用ELISA法檢測血清中的抗HBHA Ig A、Ig G抗體水平,并以ESAT-6、Ag85A作為對照抗原,評估r HBHA在結(jié)核病血清學(xué)診斷中的價值。結(jié)果重組表達質(zhì)粒p ET-28ah經(jīng)酶切及測序證實構(gòu)建正確;表達的重組蛋白主要以包涵體形式存在,經(jīng)Ni2+親和層析柱純化,可得到高純度的r HBHA蛋白;純化的r HBHA蛋白可與小鼠抗His-tag單克隆抗體特異性結(jié)合;結(jié)核病患者(TB)組血清中抗r HBHA、ESAT-6、Ag85A抗原特異性Ig G水平均顯著高于健康對照(HC)組(P0.05),且TB組的r HBHA抗原特異性Ig A水平也顯著高于HC組(P0.05),而兩組間ESAT-6、Ag85A抗原特異性Ig A水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);ROC曲線分析顯示,r HBHA抗原檢測Ig A的診斷效能較好,曲線下面積為0.711,其他兩種對照抗原ESAT-6、Ag85A的Ig A診斷效能一般,曲線下面積分別為0.512和0.531。結(jié)論 r HBHA抗原用于結(jié)核病的診斷效能較好,可作為結(jié)核病血清學(xué)診斷的備選抗原之一。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;上海市(復(fù)旦大學(xué)附屬)公共衛(wèi)生臨床中心;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 肝素結(jié)合血凝黏附素 免疫學(xué)診斷
【基金】：國家“十二五”重大傳染病專項(2013ZX10003007-003) 國家自然科學(xué)基金項目(81273328,31170876) 上海市科委醫(yī)學(xué)引導(dǎo)類項目(134119a5200) 上海市衛(wèi)生局級課題青年項目(20124Y090)
【分類號】：R378.911
【正文快照】： 2.上海市(復(fù)旦大學(xué)附屬)公共衛(wèi)生臨床中心,上海201508結(jié)核病(tuberculosis,TB)主要是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)通過呼吸道感染所致,目前仍為全球第二大傳染病,嚴(yán)重威脅著人類公共衛(wèi)生健康。據(jù)統(tǒng)計,全球每年約有860萬新發(fā)病例,每年因結(jié)核病死亡的人數(shù)約

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