本文關鍵詞：結核分枝桿菌肝素結合血凝黏附素的原核表達及其在結核病血清學診斷中的應用

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【摘要】：目的原核表達與純化結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)肝素結合血凝黏附素(heparin-binding haemagglutinin adhesion,HBHA),并初步評估其在結核病血清學診斷中的價值。方法采用PCR法從M.tb H37Rv基因組中擴增hbha基因,克隆至原核表達載體p ET-28a(+),構建重組表達質粒p ET-28ah,轉化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導表達。表達的重組HBHA(r HBHA)蛋白經Ni2+親和層析柱純化后,Western blot法分析其抗原特異性。收集71例確診的結核病患者和30名健康體檢者血清,采用ELISA法檢測血清中的抗HBHA Ig A、Ig G抗體水平,并以ESAT-6、Ag85A作為對照抗原,評估r HBHA在結核病血清學診斷中的價值。結果重組表達質粒p ET-28ah經酶切及測序證實構建正確;表達的重組蛋白主要以包涵體形式存在,經Ni2+親和層析柱純化,可得到高純度的r HBHA蛋白;純化的r HBHA蛋白可與小鼠抗His-tag單克隆抗體特異性結合;結核病患者(TB)組血清中抗r HBHA、ESAT-6、Ag85A抗原特異性Ig G水平均顯著高于健康對照(HC)組(P0.05),且TB組的r HBHA抗原特異性Ig A水平也顯著高于HC組(P0.05),而兩組間ESAT-6、Ag85A抗原特異性Ig A水平差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);ROC曲線分析顯示,r HBHA抗原檢測Ig A的診斷效能較好,曲線下面積為0.711,其他兩種對照抗原ESAT-6、Ag85A的Ig A診斷效能一般,曲線下面積分別為0.512和0.531。結論 r HBHA抗原用于結核病的診斷效能較好,可作為結核病血清學診斷的備選抗原之一。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學檢驗醫(yī)學院生命科學學院;上海市(復旦大學附屬)公共衛(wèi)生臨床中心;
【關鍵詞】： 結核分枝桿菌 肝素結合血凝黏附素 免疫學診斷
【基金】：國家“十二五”重大傳染病專項(2013ZX10003007-003) 國家自然科學基金項目(81273328,31170876) 上海市科委醫(yī)學引導類項目(134119a5200) 上海市衛(wèi)生局級課題青年項目(20124Y090)
【分類號】：R378.911
【正文快照】： 2.上海市(復旦大學附屬)公共衛(wèi)生臨床中心,上海201508結核病(tuberculosis,TB)主要是由結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)通過呼吸道感染所致,目前仍為全球第二大傳染病,嚴重威脅著人類公共衛(wèi)生健康。據統(tǒng)計,全球每年約有860萬新發(fā)病例,每年因結核病死亡的人數約

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1 段斯亮;于聲;蘇曉慶;;貴陽腐霉類枯草菌素蛋白酶基因的原核表達[J];貴陽醫(yī)學院學報;2008年03期

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5 范彬,張英起,顏真,趙寧,陳長生,藥立波,蘇成芝;人纖溶酶原餅環(huán)區(qū)5基因的原核表達及活性測定[J];中國生物化學與分子生物學報;2001年06期

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7 李婧;林建煒;張靜;郭風勁;;X盒結合蛋白1-u的原核表達及純化[J];中國生物制品學雜志;2009年04期

8 戴鶴玲;徐立;譚巖;方艷秋;;人β_2-糖蛋白Ⅰ的基因克隆和原核表達、純化及鑒定[J];中國社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2005年24期

9 王增軍;張煒;吳宏飛;眭元庚;;重組人前列腺特異性抗原的原核表達、純化與鑒定[J];中華男科學雜志;2007年12期

10 錢冠華;蒲淑萍;郭風勁;Tsutomu MORI;Hideo KOCHI;段昌柱;;P53蛋白的原核表達及純化[J];中國生物制品學雜志;2009年06期

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1 伍艷蘭;黃斯勇;牛曉麗;張麗;陳茹菲;何飛;張萍;梁英民;劉利;;人Delta-like4ext-93-217原核表達、純化及蛋白活性檢測[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

2 馬文濤;閆若潛;吳志明;劉光輝;盛敏;謝彩華;;豬白細胞介素-6的原核表達及其生物學活性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第四次豬病防控學術研討會論文集[C];2010年

3 王運華;張耀洲;;一個新的家蠶基因的克隆及其原核表達研究[A];華東六省一市生物化學與分子生物學學會2006年學術交流會論文集[C];2006年

4 劉梅芬;趙雪麗;謝彩華;劉光輝;盛敏;閆若潛;吳志明;;豬白細胞介素-2的原核表達及生物學活性測定研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第三屆豬病防控學術研討會論文集[C];2008年

5 于維麟;朱元祺;;金黃色葡萄球菌腸毒素B的基因克隆及原核表達[A];中華醫(yī)學會第七次全國檢驗醫(yī)學學術會議資料匯編[C];2008年

6 李堯華;史冬梅;韓俊燕;李昕;于順;陳彪;;14-3-3蛋白cDNA克隆、原核表達、中樞神經系統(tǒng)組化分析及其意義[A];中國神經科學學會第六屆學術會議暨學會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

7 孫東波;馮力;劉杰;時洪艷;佟有恩;劉勝旺;童光志;;豬傳染性胃腸炎病毒n基因的原核表達及重組蛋白的免疫活性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

8 王永強;韓菡;鄭世軍;;豬β防御素1基因的原核表達及體外抑菌作用分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第四次豬病防控學術研討會論文集[C];2010年

9 鄧益鋒;鄭燕玲;楊俊花;周振雷;夏繼飛;侯加法;;蛋雞TRPV6基因的原核表達、純化及抗體制備[A];中國畜牧獸醫(yī)學會——第三屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集[C];2012年

10 胡阿勇;張春杰;李銀聚;程相朝;吳庭才;張旭;廖成水;王曉利;;雞白介素5基因的克隆分析及原核表達[A];第四屆第十次全國學術研討會暨動物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集（下冊）[C];2010年

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1 張曉鳴;人IL-16的原核表達與其功能的初步研究[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2000年

2 曹秀利;楊樹PtCDD基因的原核表達及酶活分析[D];南京林業(yè)大學;2008年

3 黃新河;小鼠TAp63γ的原核表達、純化、結構及功能初步研究[D];四川大學;2007年

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5 張少斌;豌豆肌動蛋白異型體（PEAc1）的原核表達及其藻熒光探針的研制[D];中國農業(yè)大學;2004年

6 尹國華;利用Red重組系統(tǒng)構建dsRNA原核表達體系抗煙草花葉病毒的研究[D];山東農業(yè)大學;2009年

7 韓凌霞;豬圓環(huán)病毒2型基因的原核表達與單克隆抗體的制備及感染性分子克隆的動物接種試驗[D];中國農業(yè)科學院;2003年

8 于揚;重組人源GPx4及其模擬物的原核表達、結構與功能的研究[D];吉林大學;2013年

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1 趙振春;牛卵泡抑素cDNA的克隆及其原核表達[D];中國農業(yè)大學;2004年

2 江良梁;乳源抗菌—免疫調節(jié)融合肽原核表達及其抗菌活性初步研究[D];安徽醫(yī)科大學;2008年

3 羅芳;二聚化蜘蛛拖絲蛋白的原核表達、純化及多克隆抗體的制備[D];東北林業(yè)大學;2010年

4 賈偉;人類多肽：N-乙酰氨基半乳糖轉移酶2的原核表達、純化及酶活檢測[D];蘇州大學;2005年

5 王永才;豬Sirtuin3基因的克隆及原核表達[D];河南農業(yè)大學;2007年

6 張舒婕;鴨MHCⅡα、β鏈的克隆和原核表達及其抗體制備[D];華中農業(yè)大學;2008年

7 彭江麗;Metase基因高效原核表達體系的建立、表達及活性測定[D];昆明醫(yī)學院;2009年

8 賈如;細粒棘球蚴Eg95基因的克隆、原核表達及抗體制備[D];合肥工業(yè)大學;2009年

9 楊永勝;豬α1干擾素基因克隆與原核表達[D];河北農業(yè)大學;2010年

10 劉潤先;維生素A結合蛋白基因的克隆及原核表達[D];內蒙古農業(yè)大學;2003年

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