本文關(guān)鍵詞：信號(hào)素3A對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和成骨分化的影響

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【摘要】：目的:1.研究信號(hào)素3A(Semaphorin3A,Sema3A)對(duì)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)增殖和成骨分化的影響;2.初步探討ERK信號(hào)通路在Sema3A對(duì)SD大鼠BMSCs成骨向分化影響中的作用。方法:體外分離培養(yǎng)并擴(kuò)增SD大鼠BMSCs,并做成骨、成脂向誘導(dǎo)分化及流式細(xì)胞鑒定后用于本實(shí)驗(yàn)。1.使用重組Sema3A因子(0.5ug/ml和1ug/ml)處理細(xì)胞,采用MTT法檢測(cè)Sema3A對(duì)BMSCs增殖的影響;3d后,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法檢測(cè)BMSCs成骨相關(guān)基因堿性磷酸酶(ALP),骨鈣素(OCN)及Runx2 mRNA表達(dá)的變化;7d后采用酶比活性法檢測(cè)細(xì)胞ALP活性;14d后用茜素紅染色法檢測(cè)Sema3A對(duì)BMSCs形成礦化結(jié)節(jié)的影響。2.使用重組Sema3A因子處理細(xì)胞3d后,Western Blot法檢測(cè)ERK1/2以及p-ERK1/2蛋白水平的變化。加入ERK1/2信號(hào)通路特異性抑制劑PD98059后再用Sema3A處理細(xì)胞,作用3d后用Western Blot法檢測(cè)ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平以及q RT-PCR法檢測(cè)成骨相關(guān)基因的變化;處理細(xì)胞7d后,茜素紅染色法檢測(cè)礦化結(jié)節(jié)的形成。結(jié)果:分離培養(yǎng)得到的BMSCs經(jīng)鑒定具有成骨、成脂向分化的能力,細(xì)胞表面抗原CD45(-),CD29(+),CD54(+),CD90(+)。1.使用重組Sema3A因子處理BMSCs后,MTT結(jié)果顯示Sema3A因子對(duì)BMSCs的增殖無(wú)明顯影響;q RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示在兩個(gè)濃度的Sema3A處理組BMSCs成骨相關(guān)的基因ALP,OCN和Runx2 mRNA的表達(dá)量均比對(duì)照組低(P0.05);細(xì)胞堿性磷酸酶活性在Sema3A處理組比對(duì)照組降低(P0.05);茜素紅染色結(jié)果顯示BMSCs經(jīng)Sema3A處理后礦化結(jié)節(jié)形成的量明顯減少。2.Western Blot結(jié)果顯示ERK1/2蛋白磷酸化水平在成骨誘導(dǎo)組降低,而Sema3A處理細(xì)胞后可以使其水平升高。用ERK1/2信號(hào)通路特異性抑制劑PD98059處理細(xì)胞后,ERK1/2蛋白磷酸化水平明顯降低。Sema3A顯著抑制ALP,OCN及Runx2 mRNA的水平和礦化結(jié)節(jié)形成的量,但ERK信號(hào)通路被PD98059阻斷后,Sema3A的作用則明顯被減弱。結(jié)論:Sema3A對(duì)BMSCs的增殖無(wú)明顯影響,但抑制其成骨分化。這種抑制作用可能是Sema3A激活了ERK信號(hào)通路,使ERK1/2蛋白磷酸化水平升高而發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：信號(hào)素3A 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨分化 ERK信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一部分 信號(hào)素 3A對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和成骨分化影響的實(shí)驗(yàn)研究13-28
• 1 材料與方法13-20
• 2 結(jié)果20-25
• 3 討論與結(jié)論25-28
• 第二部分 信號(hào)素 3A影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨向分化的機(jī)制的初步研究28-37
• 1 材料與方法28-32
• 2 結(jié)果32-35
• 3 討論與結(jié)論35-37
• 全文總結(jié)37-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 文獻(xiàn)綜述45-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士研究生期間參與發(fā)表的文章53

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9 李R既，

本文編號(hào)：618607