本文關(guān)鍵詞：pmCherry-C1-Argonaute1重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定

  更多相關(guān)文章： 人類Argonaute蛋白 pmCherry-C 重組質(zhì)粒 融合蛋白 應激顆粒

【摘要】：目的構(gòu)建并鑒定pmCherry-C1-Argonaute1重組質(zhì)粒,為深入研究Argonaute1蛋白在細胞應激及相關(guān)疾病的生物學作用奠定基礎。方法提取He La細胞總RNA,反轉(zhuǎn)錄出含Argonaute1的c DNA;以Argonaute1 c DNA為模板,采用PCR法擴增出帶有EcoRⅠ和Bam HⅠ雙酶切的目的基因;采用雙酶切法將目的片段連接到pmCherry-C1載體上;將構(gòu)建成功的pmCherry-C1-Argonaute1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入He La細胞內(nèi),以Western blotting法檢測Argonaute1與櫻桃紅(Cherry)蛋白的融合表達情況;以激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)Argonaute1蛋白與細胞應激顆粒的標記蛋白(G3BP)及加工體的標記蛋白(DCP1α)的應激共定位關(guān)系。結(jié)果以EcoRⅠ、Bam HⅠ單、雙酶切及基因測序法鑒定構(gòu)建的重組質(zhì)粒無誤;融合蛋白表達陽性;當細胞受到應激時,Argonaute1蛋白與G3BP、DCP1α蛋白共定位。結(jié)論本研究成功構(gòu)建重組pmCherry-C1-Argonaute1質(zhì)粒。該質(zhì)粒可有效表達Cherry標記的Argonaute1融合蛋白,有助于深入研究Argonaute1蛋白在細胞應激及相關(guān)疾病領(lǐng)域的生物學作用。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學;
【關(guān)鍵詞】： 人類Argonaute蛋白 pmCherry-C 重組質(zhì)粒 融合蛋白 應激顆粒
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31370749/31571380) 國家杰出青年基金資助項目(31125012) 教育部“創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃”(IRT13085) 天津市應用基礎與前沿技術(shù)研究計劃(15JCQNJC09900)
【分類號】：Q782;R3416
【正文快照】： 應激蛋白Argonaute1是一種多功能蛋白,參與RNA干擾及應激顆粒(SGs)、加工體(PBs)形成等多種細胞生物學過程[1~3]。pm Cherry-C1是一種可以編碼紅色熒光蛋白的真核表達載體。2015年9~11月,本研究通過基因工程技術(shù)將Argonaute1基因片段連接至pm Cherry-C1載體,構(gòu)建pm Cherry-C1-

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本文編號：611014