發(fā)布時(shí)間：2017-07-28 14:17

  本文關(guān)鍵詞：2型豬鏈球菌細(xì)胞分裂蛋白DivIVA的原核表達(dá)及純化

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【摘要】：目的利用原核表達(dá)系統(tǒng)制備2型豬鏈球菌細(xì)胞分裂起始因子DivIVA重組蛋白并進(jìn)行純化,為研究其在調(diào)控細(xì)胞分裂中的作用奠定基礎(chǔ)。方法以2型豬鏈球菌05ZYH33全基因組為模板,PCR擴(kuò)增divIVA基因片段,經(jīng)BamHⅠ和XholⅠ雙酶切后將目的片段連接至表達(dá)載體pET28a,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a-divIVA,經(jīng)測(cè)序鑒定后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入表達(dá)菌E.coli BL21,以終濃度為0.1mmol/L的IPTG于37℃培養(yǎng)4h,誘導(dǎo)DivIVA蛋白表達(dá)。用Ni離子親和層析柱分離純化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行檢測(cè)和驗(yàn)證。結(jié)果成功構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a-divIVA,并在E.coli BL21中表達(dá)主要以包涵體形式存在的DivIVA蛋白。包涵體蛋白經(jīng)8mol/L脲變性溶解后經(jīng)Ni離子親和層析柱純化,獲得的目的蛋白經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)分子質(zhì)量為36ku,與預(yù)期大小相符;經(jīng)Western blot檢測(cè),該蛋白能被相應(yīng)抗體特異性識(shí)別。結(jié)論在E.coli BL21中成功表達(dá)并純化了DivIVA蛋白,為研究該蛋白在2型豬鏈球菌的細(xì)胞分裂機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;南京師范大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 型豬鏈球菌 DivIVA蛋白 蛋白原核表達(dá)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81571965;No.81172794;No.81071317;No.81471920) 江蘇省自然科學(xué)基金(No.BK20151091) 江蘇省333工程科研資助項(xiàng)目(BRA2014363) 南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技創(chuàng)新課題(No.ZX39)聯(lián)合資助
【分類號(hào)】：R378.12
【正文快照】： *?**?細(xì)胞分裂過(guò)程是一切細(xì)胞生命進(jìn)程中的重要事件,通過(guò)細(xì)胞分裂,親本將遺傳物質(zhì)平均分配到子代細(xì)胞中以保證遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定和物種的延續(xù)。細(xì)胞分裂起始因子DivIVA是原核生物細(xì)胞分裂過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白,在厚壁菌門(mén)中DivIVA是高度保守的膜結(jié)合蛋白[1]。細(xì)胞分裂過(guò)程中DivIVA作

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本文編號(hào)：584456