本文關(guān)鍵詞：惡性瘧原蟲PfRNase Ⅱ的克隆表達與降解特性的初步分析

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【摘要】：目的利用原核表達系統(tǒng)誘導表達惡性瘧原蟲融合蛋白pGEX-PfRNaseⅡ,并分析其RNA降解特性。方法分析并選取惡性瘧原蟲3D7株P(guān)fRNaseⅡ的活性區(qū),以cDNA為模板PCR擴增目的片段。將目的片段插入到pGEX-4T-1表達載體中,構(gòu)建pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重組表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21-CodonPlus(DE3),利用IPTG誘導表達目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ。應用Glutathione-SepharoseTM 4B樹脂純化目的蛋白。并用pGEX-PfRNaseⅡ體外分析PfRNaseⅡ的RNA降解特性。結(jié)果經(jīng)PCR、雙酶切、測序鑒定,pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重組表達質(zhì)粒構(gòu)建正確,轉(zhuǎn)化DE3后在IPTG的作用下表達目的蛋白。純化的目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ在體外可降解單鏈RNA,但不能降解雙鏈RNA。pGEX-PfRNaseⅡ在低濃度的Mg2+條件下降解活性較強,高濃度Mg2+條件下活性受到抑制,在5mmol/L EDTA存在下活性降低。結(jié)論克隆表達的pGEX-PfRNaseⅡ重組蛋白能水解單鏈RNA,且該水解活性具有二價金屬離子依賴性。
【作者單位】： 吉林大學人獸共患病研究所人獸共患病教育部重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 瘧原蟲 惡性 PfRNaseⅡ 原核表達 RNA降解
【分類號】：R382
【正文快照】： *在真核生物中,DNA轉(zhuǎn)錄生成RNA,然而其中只有極少部分的RNA編碼蛋白質(zhì),大部分基因組序列轉(zhuǎn)錄生成非編碼RNA(ncRNA)[1-2]。ncRNA根據(jù)其功能的不同可分為持家ncRNA和調(diào)節(jié)ncRNA,其中調(diào)節(jié)ncRNA曾被認為是轉(zhuǎn)錄“噪音”。隨著測序技術(shù)的發(fā)展,越來越多的研究表明ncRNA可在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄，

本文編號：549786