本文關(guān)鍵詞：狂犬病病毒M蛋白在桿狀病毒中的表達(dá)、純化及多克隆抗體的制備

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【摘要】：為表達(dá)狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)基質(zhì)蛋白(M)蛋白,進(jìn)而制備多克隆抗體。本研究以狂犬病病毒BD06株RNA為模版,通過RT-PCR擴增M蛋白基因全序列,將其插入質(zhì)粒pFastbac I中,獲取的重組質(zhì)粒pFastbac I-M,經(jīng)酶切鑒定后,轉(zhuǎn)化到DH10Bac E.coli感受態(tài)中,以獲取重組穿梭質(zhì)粒Bacmid-M。用lipofectamine2000介導(dǎo)Bacmid-M轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞獲取重組桿狀病毒AcMNPV-M。用抗His標(biāo)簽的單體、犬抗RV陽性血清及兔抗RV陽性血清通過Western-Blot鑒定重組蛋白的表達(dá)及其反應(yīng)原性。用鎳離子親和層析柱純化重組蛋白,并免疫新西蘭大耳白兔制備多克隆抗體,用Western-Blot和FAVN試驗鑒定多克隆抗體的反應(yīng)原性及其病毒中和效價。結(jié)果表明:(1)利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功的表達(dá)了大小約為25kD的重組M蛋白;(2)重組M蛋白具有良好的免疫原性和反應(yīng)原性;(3)制備的多克隆抗體與狂犬病病毒BD06、SRV 9、CVS-24、ERA、PV 2061及aG株的M蛋白均能發(fā)生特異性反應(yīng),但其無病毒中和能力。本研究完成了重組M蛋白的表達(dá)、純化并制備了其多克隆抗體,為進(jìn)一步研究M蛋白的生物學(xué)功能奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所吉林省人獸共患病預(yù)防與控制重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 狂犬病病毒 基質(zhì)蛋白 桿狀病毒 表達(dá) 純化 多克隆抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31472176)
【分類號】：R373
【正文快照】： 狂犬病是一種古老的傳染病,該病主要引起人類以及溫血動物的急性致死性腦脊髓炎,并以恐水,精神沉郁,暴躁不安,出現(xiàn)攻擊或其他反常行為,進(jìn)行性麻痹和最終死亡為主要臨床特征的一種人獸共患病傳染病,致死率幾乎100%。至今,世界上每年仍約有50 000人死于狂犬病。給人類的生命健康

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓改會;李回;孟先明;羅廷榮;;狂犬病病毒L蛋白的研究進(jìn)展[J];廣西畜牧獸醫(yī);2010年02期

2 張茂林;關(guān)振宏;段銘;黃英玉;王歡平;孟銳奇;;幾種糖對4℃貯存狂犬病病毒穩(wěn)定性的影響[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2010年05期

3 ;應(yīng)用免疫熒光抗體技術(shù)檢測豬的狂犬病病毒[J];農(nóng)業(yè)科技通訊;1997年09期

4 張海,金昌德,李六金,施新猷,婁清林,李秦;狂犬病病毒3aG株糖蛋白重組質(zhì)粒構(gòu)建及其體液免疫的研究[J];中國獸醫(yī)科技;2002年03期

5 姜海龍;錢愛東;;狂犬病病毒糖/核融合基因原核表達(dá)克隆質(zhì)粒的構(gòu)建與分析[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2005年06期

6 李影;段銳;錢愛東;;鹿源狂犬病野毒8202株基因型的研究[J];經(jīng)濟動物學(xué)報;2005年04期

7 蔡月琴;馬益萍;申會剛;郭軍慶;周繼勇;;狂犬病病毒核蛋白基因在大腸桿菌中的高效表達(dá)[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2007年02期

8 胡志鵬;鐘江;;狂犬病病毒研究進(jìn)展[J];微生物與感染;2007年02期

9 王巖;王憲文;王新衛(wèi);;狂犬病病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年21期

10 王曉光;侯勇躍;唐青;;狂犬病病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];畜牧與飼料科學(xué);2008年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 丁繼超;張海林;章域震;楊衛(wèi)紅;馮云;李浩;唐青;;云南省狂犬病病毒分子流行病學(xué)研究[A];2010全國狂犬病防控高層論壇論文集[C];2010年

2 孟勝利;;狂犬病病毒在中國及其它亞洲國家的動態(tài)進(jìn)化研究[A];第3屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

3 黃福林;;狂犬病病毒的電鏡觀察及該病的傳播[A];第四次全國電子顯微學(xué)會議論文摘要集[C];1986年

4 胡青海;宋翠萍;丁鏟;;狂犬病病毒的結(jié)構(gòu)蛋白研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會成立大會暨第一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

5 魏玉榮;易忠;符子華;馬素珍;簡子健;王海烽;魏婕;;狂犬病病毒口服疫苗株SRV_9全長基因質(zhì)粒的構(gòu)建[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

6 李海濤;扈榮良;張守峰;肖躍強;袁慧君;涂長春;;狂犬病病毒核蛋白基因重組犬2型腺病毒構(gòu)建研究[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

7 潘鐵驪;張守峰;扈榮良;;幾種理化因子對狂犬病病毒分離株感染力影響的再檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會成立大會暨第一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

8 龔文杰;江禹;曾政;李茂;王莉莉;劉浩;熊仲良;涂長春;;動物狂犬病病毒街毒株的細(xì)胞分離鑒定[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

9 張守峰;劉曄;潘鐵驪;張菲;扈榮良;;狂犬病病毒街毒株的序列分析及市售疫苗效力研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會成立大會暨第一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

10 朱妍;龔文杰;楊瑞婷;馮燁;涂長春;;狂犬病病毒街毒株準(zhǔn)種特性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第三次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王君平;快速檢測狂犬病病毒技術(shù)研發(fā)成功[N];人民日報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 張建明;福建省狂犬病流行病學(xué)及病毒學(xué)特征研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

2 張守峰;狂犬病病毒的RNA干擾研究[D];吉林大學(xué);2007年

3 馮昊;狂犬病病毒、細(xì)小病毒病毒樣粒子及嵌合細(xì)小病毒樣粒子的構(gòu)建、鑒定與實驗免疫研究[D];吉林大學(xué);2011年

4 潘鐵驪;狂犬病病毒BD06株生物學(xué)特性鑒定及反向遺傳系統(tǒng)的建立[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

5 黃瑩;狂犬病病毒CTN株反向遺傳系統(tǒng)的建立[D];吉林大學(xué);2009年

6 孟勝利;中國流行的狂犬病病毒時空進(jìn)化分析[D];武漢生物制品研究所;2010年

7 李真光;中和抗體結(jié)合MCP-1對狂犬病暴露后預(yù)防研究及嵌合糖蛋白重組狂犬病病毒的構(gòu)建[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

8 薛向紅;狂犬病病毒CVS-11株感染性cDNA克隆的構(gòu)建及其應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2014年

9 焦文強;兩株狂犬病病毒全基因組序列測定及aG株反向遺傳操作系統(tǒng)的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹亮;抗狂犬病病毒單克隆抗體的制備及應(yīng)用研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 黎銘;狂犬病新型口服疫苗—糖蛋白表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建以及表達(dá)細(xì)菌的篩選[D];廣西大學(xué);2006年

3 張建;中國狂犬病病毒的分離鑒定及全基因組分子特征研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 章民;狂犬病病毒L蛋白聚合酶活性部位的原核表達(dá)與純化及多克隆抗體的制備[D];廣西大學(xué);2012年

5 王衛(wèi)華;狂犬病ERA株G基因及其缺失片段表達(dá)載體的構(gòu)建和糖蛋白的表達(dá)[D];廣西大學(xué);2006年

6 趙雪超;狂犬病病毒基質(zhì)蛋白的真核表達(dá)及其在細(xì)胞中的定位[D];天津農(nóng)學(xué)院;2013年

7 王林棟;基于狂犬病病毒Leader序列熒光定量RT-PCR及其應(yīng)用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2014年

8 吳慧;中國狂犬病流行現(xiàn)狀及病毒P、M基因遺傳進(jìn)化研究[D];山東大學(xué);2010年

9 焦文濤;2005-2012年中國狂犬病病原檢測調(diào)查及低發(fā)地區(qū)病毒N基因分子特征分析[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 錢方;用于狂犬病口服免疫的犬2型腺病毒重組載體的相關(guān)技術(shù)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2014年

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