本文關(guān)鍵詞：鞭蟲乳清酸蛋白TtWAP-3的原核表達、純化及其活性研究

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【摘要】：目的克隆、原核表達人鞭蟲(Trichuris trichiura)乳清酸蛋白TtWAP-3,分析其生物學活性。方法分別以鞭蟲成蟲前端及尾端cDNA為模板,通過PCR擴增TtWAP-3編碼基因;將TtWAP-3編碼基因克隆至原核表達載體pET32a-sumo,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導表達目的蛋白并進行Ni-NTA親和純化和SUMO酶酶切,用發(fā)色底物法檢測rTtWAP-3對蛋白酶的抑制活性。結(jié)果在成蟲前端及尾端均成功克隆獲得TtWAP-3編碼基因序列,構(gòu)建的原核表達重組質(zhì)粒pET32a-sumo/TtWAP-3在大腸埃希菌表達rTtWAP-3,該蛋白對人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)和人蛋白酶3(PR3)有抑制活性,其抑制人NE(20nmol/L)、人PR3(200nmol/L)50%活性的濃度分別約為2.25μmol/L和5.34μmol/L。結(jié)論成功獲得原核表達的重組TtWAP-3,該蛋白對人NE及人PR3均有抑制作用,為研究TtWAP-3對宿主的免疫調(diào)節(jié)作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學寄生蟲學教研室;
【關(guān)鍵詞】： 鞭蟲 乳清酸蛋白 原核表達 中性粒細胞彈性蛋白酶 蛋白酶
【基金】：廣東省高等學校科技創(chuàng)新項目(No.2013KJCX0087) 廣東醫(yī)學院科技創(chuàng)新團隊項目(No.STIF201107)
【分類號】：R383.14
【正文快照】： *?**?鞭蟲(Trichuris trichiura)是人體常見寄生蟲之一,能引起宿主營養(yǎng)不良、貧血、發(fā)育遲緩等癥狀,估計全球感染人數(shù)超過4億[1]。近年研究表明,鞭蟲可參與調(diào)控宿主免疫,可用于防治炎癥性疾病,如用動物鞭蟲-豬鞭蟲卵(T.suisova,TSO)防治炎癥性疾病的臨床研究[2]。然而,目前對

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