本文關(guān)鍵詞：鞭蟲(chóng)乳清酸蛋白TtWAP-3的原核表達(dá)、純化及其活性研究

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【摘要】：目的克隆、原核表達(dá)人鞭蟲(chóng)(Trichuris trichiura)乳清酸蛋白TtWAP-3,分析其生物學(xué)活性。方法分別以鞭蟲(chóng)成蟲(chóng)前端及尾端cDNA為模板,通過(guò)PCR擴(kuò)增TtWAP-3編碼基因;將TtWAP-3編碼基因克隆至原核表達(dá)載體pET32a-sumo,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白并進(jìn)行Ni-NTA親和純化和SUMO酶酶切,用發(fā)色底物法檢測(cè)rTtWAP-3對(duì)蛋白酶的抑制活性。結(jié)果在成蟲(chóng)前端及尾端均成功克隆獲得TtWAP-3編碼基因序列,構(gòu)建的原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET32a-sumo/TtWAP-3在大腸埃希菌表達(dá)rTtWAP-3,該蛋白對(duì)人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)和人蛋白酶3(PR3)有抑制活性,其抑制人NE(20nmol/L)、人PR3(200nmol/L)50%活性的濃度分別約為2.25μmol/L和5.34μmol/L。結(jié)論成功獲得原核表達(dá)的重組TtWAP-3,該蛋白對(duì)人NE及人PR3均有抑制作用,為研究TtWAP-3對(duì)宿主的免疫調(diào)節(jié)作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學(xué)寄生蟲(chóng)學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 鞭蟲(chóng) 乳清酸蛋白 原核表達(dá) 中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶 蛋白酶
【基金】：廣東省高等學(xué)校科技創(chuàng)新項(xiàng)目(No.2013KJCX0087) 廣東醫(yī)學(xué)院科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(No.STIF201107)
【分類(lèi)號(hào)】：R383.14
【正文快照】： *?**?鞭蟲(chóng)(Trichuris trichiura)是人體常見(jiàn)寄生蟲(chóng)之一,能引起宿主營(yíng)養(yǎng)不良、貧血、發(fā)育遲緩等癥狀,估計(jì)全球感染人數(shù)超過(guò)4億[1]。近年研究表明,鞭蟲(chóng)可參與調(diào)控宿主免疫,可用于防治炎癥性疾病,如用動(dòng)物鞭蟲(chóng)-豬鞭蟲(chóng)卵(T.suisova,TSO)防治炎癥性疾病的臨床研究[2]。然而,目前對(duì)

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