發(fā)布時間：2017-07-02 11:19

  本文關(guān)鍵詞：人源性Rab38熒光融合蛋白表達載體的構(gòu)建及功能鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建人源性Rab38與EGFP融合蛋白表達載體pEGFP-Rab38,觀察Rab38在人黑素細胞瘤細胞系A(chǔ)375中的細胞定位情況,為進一步研究Rab38在黑素代謝中的作用提供實驗依據(jù)。方法收集A375細胞,提取總RNA并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。特異性引物PCR擴增Rab38片段并插入pEGFP-C3載體,隨后轉(zhuǎn)化至感受態(tài)大腸桿菌DH5α中,挑取單克隆菌落進行鑒定。將鑒定正確的重組表達載體轉(zhuǎn)染A375細胞,檢測細胞中Rab38和Tyrp1(酪氨酸酶相關(guān)蛋白1)的表達并觀察Rab38的亞細胞定位。結(jié)果 pEGFP-Rab38重組質(zhì)粒經(jīng)菌液PCR、雙酶切和測序鑒定正確;轉(zhuǎn)染A375細胞后,激光共聚焦顯微鏡觀察到Rab38定位于胞漿中,且大量聚集于細胞核周圍;實時定量PCR和Western blot可檢測出細胞中EGFP-Rab38融合蛋白的表達,且細胞中Tyrp1的表達明顯升高。結(jié)論融合蛋白表達載體pEGFP-Rab38成功構(gòu)建,觀察了Rab38在細胞中的定位并初步研究了其對黑素合成關(guān)鍵蛋白Tyrp1的影響,為進一步研究Rab38在黑素代謝中的作用奠定了良好的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院皮膚科;武漢市江夏區(qū)第一人民醫(yī)院皮膚科;華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院麻醉科;
【關(guān)鍵詞】： Rab 重組質(zhì)粒 亞細胞定位 黑素代謝
【基金】：國家自然科學基金(81371728,81472864)
【分類號】：R334.5;Q78
【正文快照】： 細胞內(nèi)的蛋白和脂類的轉(zhuǎn)運是一些膜性細胞器的產(chǎn)生和彼此間信息交流所必須的基本生物過程。囊泡轉(zhuǎn)運是細胞器之間的信息交流的一種重要形式,這種復雜的生物過程,包括供體細胞器中囊泡狀 或管狀載體的形成、載體向受體細胞器的移動、載體與受體細胞器的接觸和融合[1]。細胞內(nèi)

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本文編號：509705