本文關(guān)鍵詞：兩株新建人胚肺二倍體細胞株的細胞生物學研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]疫苗接種是能夠抵抑人類及動物病毒感染性疾病最積極有效的辦法之一。隨著病毒性疾病的不斷增多及人們對病毒性疾病認識清晰度的不斷提高,疫苗的需求量也日漸增加。各研發(fā)機構(gòu)致力于新疫苗的研發(fā)及生產(chǎn),在保證疫苗的品種及數(shù)量不斷增多的同時,疫苗的質(zhì)量也越發(fā)受到重視,保障疫苗的安全性及有效性是保障疫苗生產(chǎn)質(zhì)量的基礎(chǔ)。疫苗生產(chǎn)質(zhì)量的控制包括原材料、中間產(chǎn)物、終產(chǎn)品以及整個生產(chǎn)過程的控制,細胞基質(zhì)作為疫苗生產(chǎn)的原材料,是保證疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵,應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)的細胞有原代細胞、傳代細胞、人二倍體細胞,其中人二倍體細胞相比于原代細胞及傳代細胞有能充分鑒定和利于標準化的優(yōu)點,可實現(xiàn)細胞種子庫系統(tǒng),建立的細胞庫可用于多年生產(chǎn),有利于質(zhì)量控制,以及其無致癌性、無外源因子污染,被認為是生產(chǎn)人用疫苗比較安全和穩(wěn)定的細胞基質(zhì),越來越多的被用于生產(chǎn)人用疫苗,目前人二倍體細胞生產(chǎn)的疫苗已在我國大量上市,比如甲肝疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、風疹減毒活疫苗、水痘疫苗等。當然,人二倍體細胞資源稀缺,且二倍體細胞傳代代次有限,為適應(yīng)疫苗研發(fā)及生產(chǎn)的要求,需要不斷建立新的二倍體細胞來供給需求。因此,越來越多的疫苗研發(fā)及生產(chǎn)機構(gòu)致力于二倍體細胞的研發(fā),希望培養(yǎng)出穩(wěn)定的能用于疫苗生產(chǎn)的二倍體細胞來保證疫苗生產(chǎn)原材料的來源。本課題即是在KMB-17細胞株建株的基礎(chǔ)上對兩株新分離的人胚肺二倍體細胞株的細胞生物學特性進行研究,旨在建立一株新的適合于疫苗研發(fā)及生產(chǎn)的良好二倍體細胞。[方法]分別對從人胚肺分離的兩株細胞(N2細胞株、N3細胞株)的細胞生物學特性進行研究,包括對細胞傳代過程中細胞形態(tài)及生長狀態(tài)的觀察、細胞凍存復(fù)蘇后細胞的存活狀況及細胞形態(tài)的觀察、對細胞傳代過程中不同代次細胞生長曲線的繪制以及通過分析細胞周期來了解細胞傳代過程中形態(tài)及活性變化；通過HE染色及免疫熒光的方法對成纖維細胞進行鑒別；通過G顯帶染色體核型分析檢查細胞在傳代過程中的穩(wěn)定性；同時,我們還采用裸鼠致瘤性實驗及軟瓊脂克隆形成實驗分析了細胞的致瘤性,對細胞的安全性進行了初步評估。[結(jié)果]通過在傳代過程中的細胞形態(tài)變化及活性分析,可以看出,隨著細胞傳代代次的增加,細胞的生長活性逐漸降低,在高代次時明顯減弱,細胞只在較高代次時形態(tài)發(fā)生改變：通過HE染色及免疫熒光的方法結(jié)合,細胞為紡錘形、波形蛋白鑒定為陽性,符合成纖維細胞基本特征；通過G顯帶方法對染色體分析結(jié)果表明,隨著傳代次數(shù)的增加,這兩株細胞的遺傳性保持穩(wěn)定,符合《中國藥典》人二倍體細胞檢定規(guī)程；通過細胞致瘤性分析,顯示兩株細胞無致瘤性。[結(jié)論]本課題根據(jù)《中國藥典》生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程中人二倍體細胞株建株相關(guān)規(guī)定對N2、N3細胞株的特性進行鑒別和檢定,通過上訴實驗方法研究,證明N2、N3兩株細胞為典型的人二倍體成纖維細胞,細胞活性較好,無致瘤性,傳代過程中及凍存后遺傳性狀穩(wěn)定,可考慮作為疫苗候選細胞基質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：人二倍體細胞 疫苗 質(zhì)量
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-16
• 1 人二倍體細胞發(fā)展史10-12
• 2 人二倍體細胞作為疫苗細胞基質(zhì)的緣由及優(yōu)勢12-16
• 實驗材料和方法16-26
• 1 實驗材料16-18
• 2 實驗方法18-26
• 實驗結(jié)果26-42
• 1 細胞體外傳代情況26-27
• 2 復(fù)蘇細胞情況27
• 3 細胞電鏡結(jié)果27-29
• 4 細胞生長曲線29-30
• 5 細胞周期結(jié)果30-33
• 6 HE染色和免疫熒光結(jié)果33-34
• 7 染色體核型分析結(jié)果34-36
• 8 致瘤性實驗結(jié)果36-42
• 實驗討論42-50
• 結(jié)論50-52
• 參考文獻52-56
• 附錄一：主要縮略詞56-57
• 附錄二：主要溶液配置57-60
• 綜述60-68
• 參考文獻66-68
• 致謝68-69
• 攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果69
• 個人簡介69

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：509716