本文關(guān)鍵詞：兩株新建人胚肺二倍體細(xì)胞株的細(xì)胞生物學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]疫苗接種是能夠抵抑人類及動(dòng)物病毒感染性疾病最積極有效的辦法之一。隨著病毒性疾病的不斷增多及人們對(duì)病毒性疾病認(rèn)識(shí)清晰度的不斷提高,疫苗的需求量也日漸增加。各研發(fā)機(jī)構(gòu)致力于新疫苗的研發(fā)及生產(chǎn),在保證疫苗的品種及數(shù)量不斷增多的同時(shí),疫苗的質(zhì)量也越發(fā)受到重視,保障疫苗的安全性及有效性是保障疫苗生產(chǎn)質(zhì)量的基礎(chǔ)。疫苗生產(chǎn)質(zhì)量的控制包括原材料、中間產(chǎn)物、終產(chǎn)品以及整個(gè)生產(chǎn)過程的控制,細(xì)胞基質(zhì)作為疫苗生產(chǎn)的原材料,是保證疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵,應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞有原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞、人二倍體細(xì)胞,其中人二倍體細(xì)胞相比于原代細(xì)胞及傳代細(xì)胞有能充分鑒定和利于標(biāo)準(zhǔn)化的優(yōu)點(diǎn),可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞種子庫系統(tǒng),建立的細(xì)胞庫可用于多年生產(chǎn),有利于質(zhì)量控制,以及其無致癌性、無外源因子污染,被認(rèn)為是生產(chǎn)人用疫苗比較安全和穩(wěn)定的細(xì)胞基質(zhì),越來越多的被用于生產(chǎn)人用疫苗,目前人二倍體細(xì)胞生產(chǎn)的疫苗已在我國大量上市,比如甲肝疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、風(fēng)疹減毒活疫苗、水痘疫苗等。當(dāng)然,人二倍體細(xì)胞資源稀缺,且二倍體細(xì)胞傳代代次有限,為適應(yīng)疫苗研發(fā)及生產(chǎn)的要求,需要不斷建立新的二倍體細(xì)胞來供給需求。因此,越來越多的疫苗研發(fā)及生產(chǎn)機(jī)構(gòu)致力于二倍體細(xì)胞的研發(fā),希望培養(yǎng)出穩(wěn)定的能用于疫苗生產(chǎn)的二倍體細(xì)胞來保證疫苗生產(chǎn)原材料的來源。本課題即是在KMB-17細(xì)胞株建株的基礎(chǔ)上對(duì)兩株新分離的人胚肺二倍體細(xì)胞株的細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行研究,旨在建立一株新的適合于疫苗研發(fā)及生產(chǎn)的良好二倍體細(xì)胞。[方法]分別對(duì)從人胚肺分離的兩株細(xì)胞(N2細(xì)胞株、N3細(xì)胞株)的細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行研究,包括對(duì)細(xì)胞傳代過程中細(xì)胞形態(tài)及生長狀態(tài)的觀察、細(xì)胞凍存復(fù)蘇后細(xì)胞的存活狀況及細(xì)胞形態(tài)的觀察、對(duì)細(xì)胞傳代過程中不同代次細(xì)胞生長曲線的繪制以及通過分析細(xì)胞周期來了解細(xì)胞傳代過程中形態(tài)及活性變化；通過HE染色及免疫熒光的方法對(duì)成纖維細(xì)胞進(jìn)行鑒別；通過G顯帶染色體核型分析檢查細(xì)胞在傳代過程中的穩(wěn)定性；同時(shí),我們還采用裸鼠致瘤性實(shí)驗(yàn)及軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)分析了細(xì)胞的致瘤性,對(duì)細(xì)胞的安全性進(jìn)行了初步評(píng)估。[結(jié)果]通過在傳代過程中的細(xì)胞形態(tài)變化及活性分析,可以看出,隨著細(xì)胞傳代代次的增加,細(xì)胞的生長活性逐漸降低,在高代次時(shí)明顯減弱,細(xì)胞只在較高代次時(shí)形態(tài)發(fā)生改變：通過HE染色及免疫熒光的方法結(jié)合,細(xì)胞為紡錘形、波形蛋白鑒定為陽性,符合成纖維細(xì)胞基本特征；通過G顯帶方法對(duì)染色體分析結(jié)果表明,隨著傳代次數(shù)的增加,這兩株細(xì)胞的遺傳性保持穩(wěn)定,符合《中國藥典》人二倍體細(xì)胞檢定規(guī)程；通過細(xì)胞致瘤性分析,顯示兩株細(xì)胞無致瘤性。[結(jié)論]本課題根據(jù)《中國藥典》生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程中人二倍體細(xì)胞株建株相關(guān)規(guī)定對(duì)N2、N3細(xì)胞株的特性進(jìn)行鑒別和檢定,通過上訴實(shí)驗(yàn)方法研究,證明N2、N3兩株細(xì)胞為典型的人二倍體成纖維細(xì)胞,細(xì)胞活性較好,無致瘤性,傳代過程中及凍存后遺傳性狀穩(wěn)定,可考慮作為疫苗候選細(xì)胞基質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：人二倍體細(xì)胞 疫苗 質(zhì)量
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-16
• 1 人二倍體細(xì)胞發(fā)展史10-12
• 2 人二倍體細(xì)胞作為疫苗細(xì)胞基質(zhì)的緣由及優(yōu)勢12-16
• 實(shí)驗(yàn)材料和方法16-26
• 1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-26
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-42
• 1 細(xì)胞體外傳代情況26-27
• 2 復(fù)蘇細(xì)胞情況27
• 3 細(xì)胞電鏡結(jié)果27-29
• 4 細(xì)胞生長曲線29-30
• 5 細(xì)胞周期結(jié)果30-33
• 6 HE染色和免疫熒光結(jié)果33-34
• 7 染色體核型分析結(jié)果34-36
• 8 致瘤性實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-42
• 實(shí)驗(yàn)討論42-50
• 結(jié)論50-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 附錄一：主要縮略詞56-57
• 附錄二：主要溶液配置57-60
• 綜述60-68
• 參考文獻(xiàn)66-68
• 致謝68-69
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果69
• 個(gè)人簡介69

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：509716