本文關(guān)鍵詞：HIV-1gp140蛋白不同聚合體的純化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的對(duì)HIV-1 CN54膜蛋白gp140的不同聚合體進(jìn)行純化。方法將在哺乳動(dòng)物細(xì)胞Free Style 293F中表達(dá)的gp140蛋白經(jīng)過糖基化親和層析、陰離子交換層析和凝膠排阻層析3種純化方法進(jìn)行分離,并對(duì)該純化方法進(jìn)行優(yōu)化。采用ELISA方法檢測(cè)不同結(jié)構(gòu)抗原與廣譜中和抗體的特異性反應(yīng)。結(jié)果選擇lentil lectin填料進(jìn)行糖基化親和層析,純化的gp140蛋白為4.56 mg/L,得率為89.9%;選擇弱陰離子填料DEAE用于陰離子交換層析,純化的gp140蛋白為3.87 mg/L,得率為84.8%;凝膠排阻層析純化獲得了gp140蛋白的多聚體、三聚體+二聚體以及單體3種結(jié)構(gòu)。不同結(jié)構(gòu)的gp140蛋白可與CD4結(jié)合位點(diǎn)的廣譜中和抗體VRC01以及結(jié)構(gòu)依賴性的V3區(qū)特異性廣譜中和抗體反應(yīng),具有較好的特異性,且不同聚合體在V3區(qū)結(jié)構(gòu)依賴性抗體2G12的結(jié)合抗體反應(yīng)上會(huì)存在一定差異。結(jié)論成功建立了HIV-1 gp140蛋白不同聚合體純化的方法,該方法對(duì)于其他相似蛋白的純化具有參考作用;不同結(jié)構(gòu)的gp140蛋白的分離為進(jìn)一步研究其免疫原性奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性艾滋病預(yù)防控制中心傳染病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： HIV gp蛋白 純化
【基金】：“十二五”科技重大專項(xiàng)(2012ZX10001008) 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心青年科研基金(2010A101)
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： HIV包膜糖蛋白位于病毒的表面,介導(dǎo)病毒感染細(xì)胞的融合過程,對(duì)于病毒感染細(xì)胞具有關(guān)鍵性的作用[1]。包膜糖蛋白是機(jī)體抗病毒免疫反應(yīng)的主要靶位,也是唯一能產(chǎn)生中和抗體的病毒免疫原,對(duì)于疫苗的研究具有十分重要的意義[2-4]。由于包膜蛋白存在跨膜區(qū)和膜內(nèi)區(qū),表達(dá)及純化均較難

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本文編號(hào)：494995