本文關(guān)鍵詞：鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄抑制因子145′非翻譯區(qū)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)的活性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的檢測鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄抑制因子14(positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM14)5′非翻譯區(qū)(5′untranslated region,5′UTR)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(internal ribosome entry site,IRES)的活性。方法 PCR擴(kuò)增PRDM14 5′UTR各截短序列的基因及全長基因,分別插入至雙熒光素酶和紅綠熒光報告基因中,構(gòu)建重組質(zhì)粒p RLPRDM14 S1-FL、p RL-PRDM14 S2-FL、p RL-PRDM14 S3-FL及p G-PRDM 14-R。將各重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,檢測PRDM14 5′UTR IRES元件的活性、內(nèi)部剪切位點(diǎn)和自身啟動子的活性及影響IRES活性的序列。將重組質(zhì)粒p RL-FL/5′UTR分別轉(zhuǎn)染HCT-8/WT、Hep-2、Bel7402/WT和NIH3T3細(xì)胞,檢測各細(xì)胞中PRDM14 5′UTR IRES元件的活性。結(jié)果 PRDM14 5′UTR具有內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)元件活性;不具有內(nèi)部剪切位點(diǎn)和自身啟動子活性;PRDM14 5′UTR的活性激活中心位于25~60 nt,活性抑制中心位于60~95 nt;除NIH3T3細(xì)胞外,其他細(xì)胞均具有IRES活性。結(jié)論 PRDM14 5′UTR具有典型的IRES活性,為今后深入研究PRDM14表達(dá)的調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 江南大學(xué)藥學(xué)院藥物設(shè)計與分子藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄抑制因子 內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn) 螢火蟲熒光素酶 海腎熒光素酶
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81101667) 江蘇省基礎(chǔ)研究計劃(自然科學(xué)基金)資助項(xiàng)目(BK2009-071)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄抑制因子(positive regulatory domainzinc finger protein,PRDM)是一個與人類腫瘤形成相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子家族,在細(xì)胞分化和惡變過程中發(fā)揮重要作用[1]。PRDM14是PRDM家族的成員之一,包含1個PR-domain和6個鋅指結(jié)構(gòu)�；蛐酒瑱z測表明,PRDM14于特定的未分化的人

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