本文關鍵詞：GPI錨固蛋白CD59通過LAT介導T細胞信號轉導的作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討在T系急性白血病的Jurkat細胞中,GPI錨固蛋白CD59通過接頭分子LAT介導細胞的增殖、活化、凋亡等生物學效應,研究GPI類錨固分子CD59介導T細胞信號轉導的作用機制。方法:分別構建LAT-EGFP(LAT組,LAT分子高表達)、LAT-M-EGFP(LAT-M組,LAT分子的棕櫚�；稽c突變)、neg-EGFP(neg組,陰性對照組)融合蛋白,以慢病毒為載體,轉染入Jurkat細胞中,建立穩(wěn)定表達的細胞株。CD59單克隆抗體交聯(lián)刺激CD59分子前后,利用激光共聚焦顯微鏡觀察CD59和LAT分子在細胞膜上的定位和分布情況;利用CCK8和流式細胞術檢測各組細胞的增殖活性和凋亡情況;通過電鏡觀察各組細胞中細胞器的變化情況;利用q RT-PCR和Western blot在m RNA和蛋白水平檢測T細胞信號轉導通路中相關信號分子的表達情況。結果:共聚焦顯微鏡下觀察到各組細胞的轉染效率均在80%以上,轉染細胞株構建成功。LAT組中,CD59和LAT分子均表達于細胞膜上且部分LAT分子有點簇狀聚集區(qū)-脂筏所在部位;CD59單克隆抗體交聯(lián)刺激后,CD59和LAT的點簇狀聚集區(qū)更為明顯且共同定位于脂筏。LAT-M組中,LAT分子在細胞膜上散在分布,未出現(xiàn)點簇狀聚集區(qū);CD59抗體作用后無明顯變化。與陰性對照組相比,LAT組的細胞增殖活性最高且出現(xiàn)明顯的中晚期凋亡現(xiàn)象,LAT-M組細胞的增殖活性最低,中晚期凋亡率最高;CD59抗體作用后,LAT組和neg組細胞增殖活性均明顯增高,neg組細胞凋亡減少,LAT組無明顯變化,LAT-M組細胞凋亡增加。在基因水平上,LAT組的表達高于neg組和LAT-M組,CD59抗體交聯(lián)刺激后,LAT組無明顯變化,neg組和LAT-M組均較刺激前有所增加。Western blot結果顯示,CD59抗體交聯(lián)后,LAT組和neg組的非磷酸化蛋白表達水平均明顯降低,LAT-M組無明顯變化。結論:GPI錨固蛋白CD59通過跨膜接頭蛋白LAT對T細胞信號轉導發(fā)揮調控作用,且LAT的棕櫚�；瞧浒l(fā)揮功能所必需的。這為其它GPI類錨固分子信號轉導的機制研究提供了新視野和新方向。
【關鍵詞】：CD59 Jurkat細胞 LAT 信號轉導
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 技術路線8-9
• 第一章 材料與方法9-19
• 1.1 材料9-10
• 1.1.1 主要實驗儀器9
• 1.1.2 病毒與細胞株9
• 1.1.3 主要實驗試劑9-10
• 1.2 方法10-19
• 1.2.1 Jurkat細胞的培養(yǎng)10-11
• 1.2.2 慢病毒轉染Jurkat細胞11
• 1.2.3 免疫熒光11-12
• 1.2.4 CCK8檢測細胞增殖活性12
• 1.2.5 流式細胞術檢測細胞凋亡12-13
• 1.2.6 電鏡下觀察細胞超微結構13
• 1.2.7 qRT-PCR13-15
• 1.2.8 Western blot15-18
• 1.2.9 統(tǒng)計學分析18-19
• 第二章 實驗結果19-30
• 2.1 Jurkat細胞的培養(yǎng)19
• 2.2 慢病毒轉染Jurkat細胞19-20
• 2.2.1 慢病毒轉染后的Jurkat細胞19-20
• 2.2.2 激光共聚焦顯微鏡觀察病毒轉染效率20
• 2.3 免疫熒光20-21
• 2.4 CCK8法檢測各組Jurkat細胞的增殖活性21-22
• 2.5 流式細胞術檢測各組Jurkat細胞的凋亡22-25
• 2.6 電鏡下觀察細胞的超微結構25-26
• 2.7 qRT-PCR檢測T細胞信號轉導通路中相關蛋白的表達26-28
• 2.8 Western blot檢測相關蛋白的表達28-30
• 第三章 討論30-32
• 結論32-33
• 參考文獻33-36
• 綜述36-48
• 綜述參考文獻44-48
• 攻讀學位期間的研究成果48-49
• 附錄49-51
• 致謝51-52

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 費儉;國家“973”研究項目——細胞重大生命活動的基礎與應用研究子課題:細胞信號轉導研究進展[J];生命科學;2005年04期

2 ;細胞信號轉導(基礎篇 第四版)(研究生創(chuàng)新教育系列叢書)[J];遺傳;2010年11期

3 代榮陽,周志遠,李洪;細胞信號轉導的復雜性及其動力學模擬研究[J];瀘州醫(yī)學院學報;2005年03期

4 代榮陽,楊燁,周志遠;細胞信號轉導的動態(tài)組織[J];瀘州醫(yī)學院學報;2005年04期

5 唐鐵軍;衰老與細胞信號轉導[J];第一軍醫(yī)大學學報;1999年S1期

6 劉瑜,姜勇;整合素介導的細胞信號轉導研究進展[J];生理科學進展;2005年04期

7 ;名刊封面[J];生命世界;2007年11期

8 任超,張利平;衰老及相關疾病與細胞信號轉導的關系[J];生物技術通報;2005年01期

9 劉怒云,張璐;細胞信號轉導的網絡化作用[J];國外醫(yī)學(生理、病理科學與臨床分冊);2001年04期

10 肖強,鄭海雷;14-3-3蛋白與植物細胞信號轉導[J];細胞生物學雜志;2005年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 季宇彬;張赫;汲晨鋒;;腫瘤與細胞信號轉導[A];腫瘤病因學研究與中西醫(yī)結合腫瘤綜合診療交流研討會論文集[C];2009年

2 馮子男;潘義;;細胞信號轉導的復雜網絡分析[A];第九屆全國計算（機）化學學術會議論文摘要集[C];2007年

3 王劍鋒;趙明明;劉寶全;張麗影;田文杰;范圣第;;在脂質體上以維生素B6衍生物為受體構建人工細胞信號轉導體系[A];第六屆全國化學生物學學術會議論文摘要集[C];2009年

4 來茂德;;從整合診斷走向整合治療[A];2013年蘇、浙兩省抗癌協(xié)會腫瘤標志物研究新進展學術年會暨國家級繼續(xù)教育培訓班資料匯編[C];2013年

5 張月;劉清國;;針灸與細胞信號轉導相關內容的研究[A];2011中國針灸學會年會論文集（摘要）[C];2011年

6 余應年;孫雪敏;馮朝暉;胡文蔚;魯靖;宋韜;謝海洋;;細胞信號轉導、基因表達、DNA復制保真度與哺乳細胞遺傳不穩(wěn)定[A];面向21世紀的科技進步與社會經濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

7 林育純;陳慧峰;林忠寧;陳雯;;蛋白磷酸酶2A與環(huán)境致癌作用中細胞信號轉導途徑的關系[A];中國毒理學會生化與分子毒理專業(yè)委員會第六屆全國學術會議、中國毒理學會遺傳毒理專業(yè)委員會第五屆全國學術會議、廣東省預防醫(yī)學會衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會學術會議、廣東省環(huán)境誘變劑學會學術會議論文匯編[C];2008年

8 張海港;李曉輝;;G蛋白水平的細胞信號轉導調節(jié)[A];第七屆中國抗炎免疫藥理學術會議論文摘要集[C];2000年

9 姜勇;;細胞信號轉導的組學研究策略[A];中國病理生理學會受體和信號轉導專業(yè)委員會暨消化專業(yè)委員會聯(lián)合學術會議論文匯編[C];2008年

10 徐嘉;馬中富;;細胞信號轉導抑制物的研究進展[A];2012中國中西醫(yī)結合學會急救醫(yī)學專業(yè)委員會學術年會論文集[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 ;調控細胞信號轉導開發(fā)治療腫瘤新藥[N];中國醫(yī)藥報;2002年

2 汪敏華;細胞信號轉導之謎解開[N];解放日報;2004年

3 康健;細胞信號轉導可被體外調控[N];健康時報;2010年

4 ;我發(fā)現(xiàn)細胞內信號通路“對話”機制[N];上�？萍紙�;2004年

5 本報記者 郭偉;孫大業(yè)：院士之外的三個角色[N];河北日報;2012年

6 本報記者 樊江濤;孫大業(yè)探密細胞50載[N];河北日報;2009年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉曉燕;中醫(yī)“腎應冬”調控機制與細胞信號轉導相關性的研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2004年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王麗娜;GPI錨固蛋白CD59通過LAT介導T細胞信號轉導的作用機制研究[D];青島大學;2015年

2 趙明明;在囊泡表面構筑人工細胞信號轉導體系[D];大連理工大學;2008年

3 代榮陽;節(jié)點干預對無尺度細胞信號轉導網絡的影響[D];瀘州醫(yī)學院;2006年

4 馮子男;細胞信號轉導的復雜網絡分析和燈盞花素注射液HPLC指紋圖譜相似性評價[D];四川大學;2006年

5 閆新穎;SPAP2基因的克隆、融合表達及其產物的分離純化[D];吉林大學;2006年

  本文關鍵詞：GPI錨固蛋白CD59通過LAT介導T細胞信號轉導的作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：494763