本文關(guān)鍵詞：�？刹《�6型表面特異性抗原VP1的原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的原核表達(dá)�？刹《�6型表面特異性蛋白VP1,并制備其多克隆抗體。方法篩選VP1蛋白氨基酸序列中抗原性強(qiáng)的片段,優(yōu)化基因序列,分別構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。將經(jīng)雙酶切及測序鑒定正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá),進(jìn)行15%SDS-PAGE鑒定。將融合蛋白VP1-GST及VP1-His分別用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin進(jìn)行純化。以純化后的VP1-His融合蛋白作為免疫原免疫新西蘭大耳白兔,制備多克隆抗體,以VP1-GST融合蛋白為檢測抗原,間接ELISA法檢測血清抗體效價(jià),Western blot法檢測血清抗體特異性。結(jié)果經(jīng)雙酶切及測序鑒定證明,重組質(zhì)粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1構(gòu)建正確。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相對分子質(zhì)量分別為38 000和19 000,兩種融合蛋白分別以可溶性蛋白和包涵體形式表達(dá),約占菌體總蛋白的60%和30%,純化后的純度均90%。兔抗VP1血清效價(jià)為1∶320 000,可與融合蛋白VP1-GST和VP1-His發(fā)生特異性結(jié)合。結(jié)論成功原核表達(dá)了融合蛋白VP1-His和VP1-GST,且VP1-His具有良好的免疫原性,其制備的多克隆抗體的特異性較好,為�？刹《究焖贆z測技術(shù)的建立奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： �？刹《拘� VP蛋白 原核細(xì)胞 基因表達(dá) 多克隆抗體
【基金】：國家傳染病重大專項(xiàng)(2013ZX10004804-003)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 人腸道致細(xì)胞病變孤兒病毒(enteric cytopatho-genichuman orphan virus,ECHO virus)簡稱�？刹《�,是一類單股正鏈RNA的腸道病毒,有34個(gè)血清型。�？刹《痉植加谌蚋鞯�,在人群中廣泛傳播和流行[1],可通過呼吸道和消化道傳播,其感染可引起多種人類疾病,其中無菌性腦膜炎最為常

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