發(fā)布時(shí)間：2017-06-15 21:03

  本文關(guān)鍵詞：綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染示蹤比格犬體內(nèi)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的運(yùn)用綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記技術(shù),觀察骨組織工程中種子細(xì)胞的變化和轉(zhuǎn)歸。方法使用重組腺病毒(Ad-GFP)將GFP基因轉(zhuǎn)染比格犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC),倒置相差顯微鏡下觀察BMSC形態(tài)、堿性磷酸酶(ALP)和茜素紅染色情況;熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞GFP表達(dá)狀況。待細(xì)胞標(biāo)記成功后將其離心,接種于β-磷酸三鈣(β-TCP)上,回植于比格犬脛骨內(nèi)側(cè)骨膜囊內(nèi),構(gòu)建組織工程骨記為A組;單純?chǔ)?TCP植入對(duì)稱脛骨內(nèi)側(cè)骨膜囊記為B組;單純?chǔ)?TCP植入皮下記為C組。術(shù)后2周取材,分別行組織學(xué)觀察、免疫組化檢測(cè),同時(shí)激光共聚焦顯微鏡下觀察GFP表達(dá)情況。結(jié)果體外成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)顯示,ALP染色以及茜素紅染色陽性。組織學(xué)觀察可見,A組新生骨組織以及新生血管均較B組明顯,C組未見新生骨組織。免疫組化檢測(cè)顯示,A組Ⅰ型膠原、血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子CD31染色陽性;B組Ⅰ型膠原、CD31染色部分陽性;C組未見陽性表達(dá)。免疫組化半定量檢測(cè)顯示,A、B兩組Ⅰ型膠原、CD31定量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示,A組新生骨組織內(nèi)可見GFP表達(dá),B、C組未見GFP標(biāo)記細(xì)胞。結(jié)論 BMSC是組織工程骨早期形成的重要來源,但周圍成骨細(xì)胞并非新生骨組織主要來源;移植BMSC于骨膜下可促進(jìn)新生血管形成。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院整復(fù)外科;上海市骨科內(nèi)植物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 骨組織工程 綠色熒光蛋白 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81272132)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)是造血微環(huán)境中的一種重要細(xì)胞成分,獲取相對(duì)容易,在特定的理化環(huán)境和細(xì)胞因子誘導(dǎo)下,可分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種類型細(xì)胞,且免疫原性弱,是組織工程理想的種子細(xì)胞來源[1-4]。然而,新生組織工程骨的細(xì)胞來源是體外植入BMSC

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  本文關(guān)鍵詞：綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染示蹤比格犬體內(nèi)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：453454