本文關(guān)鍵詞：白喉毒素?zé)o毒突變體H21G蛋白的分泌性表達(dá)及純化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的原核分泌性表達(dá)白喉毒素?zé)o毒突變體H21G蛋白并進(jìn)行純化,為下一步開發(fā)以重組H21G蛋白為基礎(chǔ)的疫苗奠定基礎(chǔ)。方法以p ET16a-H21G質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增H21G基因,亞克隆至p ET22b載體中,構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒p ET22b-H21G,轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)重組H21G蛋白分泌性表達(dá)。重組蛋白經(jīng)滲透壓休克,DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換層析和Phenyl Sepharose 6FF(high sub)疏水層析純化后,使用還原/非還原SDS-PAGE和HPLC法分析純化蛋白的純度,窄范圍等電聚焦分析其等電點,MALDI-TOF質(zhì)譜法分析其相對分子質(zhì)量,N-末端測序法鑒定N-末端氨基酸序列。結(jié)果重組原核分泌性表達(dá)質(zhì)粒p ET22b-H21G經(jīng)雙酶切(NcoⅠ和XhoⅠ)和測序證明構(gòu)建正確;目標(biāo)蛋白以可溶形式存在于宿主菌周質(zhì)間隙,表達(dá)量為10%~15%;經(jīng)純化后,重組蛋白純度達(dá)95%以上,等電點在4.55~6.20之間,相對分子質(zhì)量和N-末端氨基酸序列均與白喉毒素相符合。結(jié)論成功分泌性表達(dá)并純化了重組白喉毒素?zé)o毒突變體H21G蛋白,為下一步開發(fā)以重組H21G蛋白為基礎(chǔ)的疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司甘肅省疫苗工程技術(shù)研究中心;中國生物技術(shù)股份有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 白喉毒素 無毒突變體HG 分泌性表達(dá) 純化
【分類號】：R378
【正文快照】： 白喉毒素(diphtheria toxin,DTx)為白喉桿菌(Cor-ynebacterium diphtheriae)被β噬菌體溶源化后,由β噬菌體上序列長度為1 605 bp的tox基因編碼合成的外毒素[1]。DTx由535個氨基酸組成,相對分子質(zhì)量58 300,可分為3個結(jié)構(gòu)區(qū):N-端為催化區(qū),中間為穿膜區(qū),C-端為受體結(jié)合區(qū),3個區(qū)

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳清明;羅海波;;白喉外毒素的性質(zhì)及其雜交毒素的抗腫瘤作用[J];國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊);1985年01期

2 張世民;;白喉毒素:一個新型的細(xì)胞致死性酶[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);1987年06期

3 Witold cieplak;Charles Hasemann;Leon Eidels;韓汀;;人尿激酶特異地裂解白喉毒素[J];生化藥物雜志;1990年04期

4 白向陽,呂安國,吳文芳;白喉毒素越膜機(jī)理研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)雜志;2003年06期

5 汪玉蘭;;應(yīng)用人工合成白喉毒素低肽作自動抗毒性免疫接種[J];國外醫(yī)學(xué).生物制品分冊;1981年06期

6 Leon Eidels ,王蔭椿;細(xì)菌毒素的膜受體續(xù)[J];微生物學(xué)免疫學(xué)譯刊;1985年02期

7 蘇林,李萍,耿其秀,袁昌志;精制白喉毒素脫毒工藝的改進(jìn)[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1998年02期

8 竹用多惠;陳成偉;;細(xì)菌毒素研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊);1986年06期

9 王璋瑜;;Seragen的融合毒素將成為抗癌藥物[J];生物技術(shù)通報;1991年07期

10 張繼林;;受體特異性蛋白——對單克隆抗體釋放藥物的一種挑戰(zhàn)[J];國外醫(yī)學(xué)情報;1988年21期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王萍;薛一雪;;CRM197通過PI3K/AKT途徑上調(diào)caveolin-1的表達(dá)水平[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

2 張國利;劉雨玲;吳廣謀;李俊植;李樹民;岳玉環(huán);朱平;;白喉毒素-(Gly_4Ser)_2-人表皮生長因子融合蛋白的基因構(gòu)建與表達(dá)純化及其特異性細(xì)胞毒性研究[A];“加入WTO和科學(xué)技術(shù)與吉林經(jīng)濟(jì)發(fā)展——機(jī)遇·挑戰(zhàn)·責(zé)任”吉林省第二屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會論文集（下）[C];2002年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 武漢同濟(jì)醫(yī)院 主任技師 金慰鄂;何為抗體[N];家庭醫(yī)生報;2003年

  本文關(guān)鍵詞：白喉毒素?zé)o毒突變體H21G蛋白的分泌性表達(dá)及純化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：453221