本文關鍵詞：白喉毒素無毒突變體H21G蛋白的分泌性表達及純化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的原核分泌性表達白喉毒素無毒突變體H21G蛋白并進行純化,為下一步開發(fā)以重組H21G蛋白為基礎的疫苗奠定基礎。方法以p ET16a-H21G質粒為模板,PCR擴增H21G基因,亞克隆至p ET22b載體中,構建重組原核表達質粒p ET22b-H21G,轉化感受態(tài)大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導重組H21G蛋白分泌性表達。重組蛋白經滲透壓休克,DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換層析和Phenyl Sepharose 6FF(high sub)疏水層析純化后,使用還原/非還原SDS-PAGE和HPLC法分析純化蛋白的純度,窄范圍等電聚焦分析其等電點,MALDI-TOF質譜法分析其相對分子質量,N-末端測序法鑒定N-末端氨基酸序列。結果重組原核分泌性表達質粒p ET22b-H21G經雙酶切(NcoⅠ和XhoⅠ)和測序證明構建正確;目標蛋白以可溶形式存在于宿主菌周質間隙,表達量為10%~15%;經純化后,重組蛋白純度達95%以上,等電點在4.55~6.20之間,相對分子質量和N-末端氨基酸序列均與白喉毒素相符合。結論成功分泌性表達并純化了重組白喉毒素無毒突變體H21G蛋白,為下一步開發(fā)以重組H21G蛋白為基礎的疫苗奠定了基礎。
【作者單位】： 蘭州生物制品研究所有限責任公司甘肅省疫苗工程技術研究中心;中國生物技術股份有限公司;
【關鍵詞】： 白喉毒素 無毒突變體HG 分泌性表達 純化
【分類號】：R378
【正文快照】： 白喉毒素(diphtheria toxin,DTx)為白喉桿菌(Cor-ynebacterium diphtheriae)被β噬菌體溶源化后,由β噬菌體上序列長度為1 605 bp的tox基因編碼合成的外毒素[1]。DTx由535個氨基酸組成,相對分子質量58 300,可分為3個結構區(qū):N-端為催化區(qū),中間為穿膜區(qū),C-端為受體結合區(qū),3個區(qū)

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  本文關鍵詞：白喉毒素無毒突變體H21G蛋白的分泌性表達及純化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：453221