本文關(guān)鍵詞：儲(chǔ)運(yùn)條件對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：近年來,干細(xì)胞在臨床中被廣泛應(yīng)用于退行性疾病、損傷性疾病及自身免疫病等多種疾病的治療中。目前熱門研究的干細(xì)胞類型包括：胚胎干細(xì)胞(ESC)、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS)、成體干細(xì)胞(ASC)。胚胎干細(xì)胞分離于早期胚胎,具全能性,但建系需破壞胚胎,無法回避倫理問題。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞可通過逆轉(zhuǎn)錄病毒誘導(dǎo)生成,繞開了干細(xì)胞應(yīng)用的倫理問題,但仍無法保證病毒處理流程的安全性和體內(nèi)形成畸胎瘤的風(fēng)險(xiǎn)。間充質(zhì)干細(xì)胞可從多種成人組織中分離得到并具多分化潛能,分離和制備流程相對(duì)簡單,體外培養(yǎng)周期短,體內(nèi)移植后可發(fā)揮組織修復(fù)、細(xì)胞因子分泌等功能,安全性和可控性較高,因此被廣泛應(yīng)用于大規(guī)模臨床治療和實(shí)驗(yàn)當(dāng)中去。但在這些臨床應(yīng)用中,關(guān)于干細(xì)胞儲(chǔ)運(yùn)過程中細(xì)胞狀態(tài)變化的跟蹤報(bào)道極少出現(xiàn),因而我們通過模擬體外運(yùn)輸環(huán)境條件,用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)揭示細(xì)胞運(yùn)輸過程中存活率及活性的變化情況。內(nèi)容：1.從組織中分離培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UCMSCs),并參照標(biāo)準(zhǔn)MSC相關(guān)特性進(jìn)行驗(yàn)證。2.檢測白蛋白、光照和儲(chǔ)運(yùn)時(shí)間等不同外部條件對(duì)臍帶問充質(zhì)干細(xì)胞存活率的影響。方法：1.在無菌GMP層流實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下,用原代細(xì)胞貼壁法從臍帶中獲得間充質(zhì)于細(xì)胞(MSCs),并在37℃恒溫控制和5% CO2環(huán)境下進(jìn)行傳代培養(yǎng),期間通過不同倍數(shù)光學(xué)顯微鏡調(diào)換不同背景,觀察普通及染色后的MSCs形態(tài)變化,拍照并記錄相關(guān)信息,包括細(xì)胞體積、核質(zhì)比、細(xì)胞增殖速度、細(xì)胞傳代次數(shù)等。2.用流式細(xì)胞儀檢測MSCs表面標(biāo)志物表達(dá)情況,并與國際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)照。3.將培養(yǎng)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組把3.15×109/L個(gè)細(xì)胞懸浮在3 mL生理鹽水中。其中實(shí)驗(yàn)組加入1%白蛋白并避光保存,對(duì)照組分為不加白蛋白避光保存組和加白蛋白光照保存組,在0,2,4,8和24 h分別測定各組細(xì)胞數(shù)、臺(tái)盼藍(lán)拒染率和細(xì)胞存活率。結(jié)果：1.臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成功從臍帶中分離得到,為梭形且大多平行或漩渦式排列,染色后呈現(xiàn)較高的核質(zhì)比。2.間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29(93.2%)、CD44(96.5%)、CD73(99.74%)、 CD90(99.1%)、CD105(84.1%)和CD106(79.9%)高表達(dá),CD34(0.4%)和CD45(0.1%)陰性表達(dá)。3.與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組(加白蛋白且避光)的8小時(shí)細(xì)胞損失率幾乎為零,細(xì)胞存活率接近90%。不加白蛋白對(duì)照組8小時(shí)細(xì)胞損失率達(dá)38.5%,細(xì)胞存活率僅為86%。結(jié)論：1.臍帶中分離得到的細(xì)胞具有MSCs最基本的生物學(xué)特性。2.在間充質(zhì)干細(xì)胞的長途運(yùn)輸中,運(yùn)輸介質(zhì)中加入1%白蛋白可以有效保證細(xì)胞存活率。運(yùn)輸時(shí)間超出8小時(shí)后,細(xì)胞存活率降低、損失率升高。3.在16℃、避光的環(huán)境下,以1%白蛋白的生理鹽水為保存介質(zhì),臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在8小時(shí)內(nèi)均符合臨床輸注要求。
【關(guān)鍵詞】：臍帶 間充質(zhì)干細(xì)胞 白蛋白 光 存活率
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 縮略詞表11-13
• 前言13-15
• 第一部分 實(shí)驗(yàn)論文部分15-31
• 材料與方法15-19
• 結(jié)果19-27
• 討論27-30
• 結(jié)論30-31
• 第二部分 綜述部分31-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 致謝42-43
• 在學(xué)期間發(fā)表文章43-44
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表44

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本文編號(hào)：451144