本文關(guān)鍵詞：原生質(zhì)體介導(dǎo)馬爾尼菲青霉基因轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的優(yōu)化原生質(zhì)體介導(dǎo)的馬爾尼菲青霉轉(zhuǎn)化體系,為其基因功能研究提供良好的平臺。方法通過原生質(zhì)體介導(dǎo)將構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)pyrG基因插入馬爾尼菲青霉尿嘧啶缺陷株ligD(pyrG-,ligD-)中,在不含尿嘧啶的培養(yǎng)基中篩選陽性轉(zhuǎn)化子,運(yùn)用PCR驗證重組子,通過改變影響轉(zhuǎn)化效率的酶解時間、培養(yǎng)基濃度、質(zhì)粒濃度、不同配方的原生質(zhì)體洗滌液STC和不同配方的原生質(zhì)體助融劑PTC 5個條件對體系進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果 PCR驗證A.nidulans pyrG基因成功的插入ligD中,轉(zhuǎn)化子可穩(wěn)定傳代。最適合ligD原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化效率的條件為:酶解時間6h,PTC(60%PEG-4000,100mmol/L Tris-HCl pH8.0,100mmol/L CaCl2),每100μL原生質(zhì)體(106~107/mL)加入2.5μg質(zhì)粒,0.6 mol/L蔗糖SD/SDU篩選/再生培養(yǎng)基,每1μg質(zhì)粒轉(zhuǎn)化子可達(dá)68個左右。結(jié)論成功優(yōu)化了原生質(zhì)體介導(dǎo)馬爾尼菲青霉轉(zhuǎn)化體系的條件,優(yōu)化后該方法轉(zhuǎn)化效率高,為基因功能研究提供良好平臺。
【作者單位】： 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 馬爾尼菲青霉 原生質(zhì)體 轉(zhuǎn)化
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81171545)
【分類號】：R379.9
【正文快照】：

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳易,李菊裳;馬爾尼菲青霉的免疫學(xué)及分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(皮膚性病學(xué)分冊);2003年04期

2 李云,陳燕,李雪梅;馬爾尼菲青霉引起嚴(yán)重感染3例分析[J];西南軍醫(yī);2004年02期

3 侯幼紅;;馬爾尼菲青霉的研究現(xiàn)狀[J];中國真菌學(xué)雜志;2007年01期

4 董青生;馬韜;;不典型馬爾尼菲青霉的形態(tài)學(xué)對比觀察[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2009年06期

5 闕冬梅;覃巍;張軍民;;馬爾尼菲青霉的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國真菌學(xué)雜志;2010年03期

6 韋秋慧;;分析馬爾尼菲青霉的研究現(xiàn)狀[J];中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè);2013年26期

7 張馨予;梁伶;;馬爾尼菲青霉動物試驗的研究現(xiàn)狀[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2013年08期

8 鄧卓霖;馬韻;李山;;馬爾尼菲青霉的電鏡研究[J];廣西醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1988年01期

9 韋靜;李新章;;廣州首次發(fā)現(xiàn)馬爾尼菲青霉[J];廣州醫(yī)藥;1992年03期

10 云麗瓊，李勝云，梁漱溟，，鄧卓霖;原發(fā)性馬爾尼菲青霉病骨改變的X線表現(xiàn)（附八例分析）[J];中華放射學(xué)雜志;1995年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹存巍;梁伶;王文娟;羅宏;劉棟華;;中國馬爾尼菲青霉微衛(wèi)星多態(tài)性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

2 曹存巍;梁伶;Matthew C.Fisher;王文娟;羅虹;劉棟華;;中國馬爾尼菲青霉微衛(wèi)星多態(tài)性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第16次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會摘要集[C];2010年

3 侯幼紅;;馬爾尼菲青霉的形態(tài)轉(zhuǎn)換和其致病性特征[A];第二屆全國深部真菌感染學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

4 王鵬;冉玉平;尹斌;莊凱文;;馬爾尼菲青霉外分泌性酸性蛋白酶的分離純化與鑒定[A];2012年中國菌物學(xué)會學(xué)術(shù)年會會議摘要[C];2012年

5 鐘白玉;徐艷;黃云輝;黃秀英;周小芳;馮林;郝飛;;馬爾尼菲青霉感染的實驗室診斷(附16例報告)[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

6 何國華;梁宇恒;魯莎;胡永軒;李希清;席麗艷;;廣東地域環(huán)境中馬爾尼菲青霉與竹鼠關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

7 魯莎;席麗艷;胡永軒;楊亞波;;巨噬細(xì)胞體外吞噬、殺傷馬爾尼菲青霉分生孢子的實驗研究[A];中國菌物學(xué)會第五屆會員代表大會暨2011年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

8 曹存巍;李若瑜;萬U

本文編號：444156