本文關(guān)鍵詞：難提取細菌基因組DNA提取方法的比較與優(yōu)化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:比較并優(yōu)化2種試劑盒提取以巨型球菌為代表的難提取細菌基因組DNA的方法,以獲得高質(zhì)量的DNA用于高通量測序,探索高通量測序樣品的前期處理方法。方法:用Life Technologies公司的Charge Switchg DNA Mini Bacteria Kit和Roche公司的High Pure PCR Template Preparation Kit提取制備困難的巨型球菌基因組DNA,然后通過添加溶葡球菌酶和增加溶菌酶、RNase A、Protein K的投入量及延長消化時間優(yōu)化2個試劑盒,對4種方法提取的細菌基因組DNA進行濃度、純度和基因組完整性測定,選取質(zhì)量良好的基因組進行高通量測序。結(jié)果:改良后的2個試劑盒提取的巨型球菌DNA濃度較高,分別達到78.4和67.8 ng/μL,可滿足高通量測序的需求,并獲得基因組全序列。結(jié)論:改良后的2種方法是提取制備困難的巨型球菌基因組DNA更好的方法。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué);軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 高通量測序 細菌基因組 DNA提取方法
【基金】：“艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治”科技重大專項“十二五”實施計劃(2013ZX10004-605,2013ZX10004-217,2013ZX10004-607,2011ZX10004-001) 國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(2014AA021402,2012AA022-003,2015AA020108) 國家自然科學(xué)基金(81572045)
【分類號】：Q78;R378
【正文快照】： 高通量測序技術(shù)應(yīng)用于未知病原體的檢測是現(xiàn)階段疾病溯源和傳染病診治的快速有效的方法[1-2]。 在2014年暴發(fā)的埃博拉疫情中,中國研究人員基于高通量測序的基因組序列分析,展示了埃博拉病毒進化的最新情況[3]。高通量測序應(yīng)用到病原學(xué)中,可以分析環(huán)境中病原微生物的分類,深入

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本文編號：423494