本文關(guān)鍵詞：過氧化氫誘導(dǎo)弓形蟲RH株速殖子凋亡的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：剛地弓形蟲病是一種在全球內(nèi)普遍流行的人獸共患寄生蟲病。不僅對(duì)孕婦和胎兒構(gòu)成了極大的威脅,近年來又成為AIDS等免疫功能缺陷患者死亡的重要因素之一。目前抗弓形蟲藥物大部分都存在長(zhǎng)期治療效果差、難根治、高費(fèi)用且對(duì)免疫功能缺陷患者基本無治療效果等諸多缺點(diǎn),研發(fā)新型治療弓形蟲病藥物很有必要。藥物研究依賴于高效穩(wěn)定的弓形蟲體內(nèi)和體外培養(yǎng)模型,建立弓形蟲培養(yǎng)模型不僅可用于篩選新型抗弓形蟲藥物,還可用于抗弓形蟲藥物的作用機(jī)理研究。過氧化氫(Hydrogen Peroxide,H2O2)對(duì)細(xì)胞的活力和增殖力均具有抑制和/或殺傷作用,然而有關(guān)H2O2能否誘導(dǎo)弓形蟲凋亡的作用機(jī)制仍然不清楚。近年來,不少數(shù)據(jù)表明,H2O2可以誘導(dǎo)眾多細(xì)胞凋亡,本文以H2O2是否能誘導(dǎo)弓形蟲速殖子凋亡作探討,旨在進(jìn)一步闡明H2O2誘導(dǎo)弓形蟲RH株凋亡的機(jī)制,為弓形蟲病的免疫預(yù)防和臨床治療新方案的設(shè)計(jì)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。復(fù)蘇剛地弓形蟲RH株速殖子,注射接種小鼠腹腔;建立蟲體與小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7)細(xì)胞的共同培養(yǎng)體系,依次以不同比例的蟲體接種細(xì)胞,觀察蟲體在細(xì)胞內(nèi)的增殖情況,確定適宜的蟲體與細(xì)胞感染比例及培養(yǎng)時(shí)間。以濾膜過濾法純化體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)模型獲得速殖子。采用吉姆薩染色、瓊脂糖凝膠電泳、磷脂酰絲氨酸外翻分析(Annexin V法)、流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定DNA含量檢測(cè)H2O2處理弓形蟲速殖子凋亡的特征;檢測(cè)凋亡過程中胞內(nèi)鈣離子濃度變化。RH株速殖子可在RAW264.7細(xì)胞內(nèi)增殖,接種72h后細(xì)胞能完全被破壞釋放出大量蟲體,蟲體在細(xì)胞內(nèi)增殖速度和傳代間隔穩(wěn)定、形態(tài)典型,未見毒力明顯減弱。兩種濾膜對(duì)體內(nèi)白細(xì)胞清除率無明顯差異,對(duì)紅細(xì)胞清除效果隨濾膜孔徑增大依次降低,小鼠體內(nèi)速殖子的回收率隨著孔徑增大依次升高。兩種濾膜對(duì)RAW264.7細(xì)胞的清除率無明顯差異,體外培養(yǎng)的速殖子的回收率隨著濾膜孔徑增大而升高,并且兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。光鏡下觀察H2O2處理弓形蟲后,蟲體失去典型形態(tài),活力明顯下降。瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定H2O2處理速殖子后的DNA未見片段化條帶,以流式細(xì)胞儀檢測(cè)H2O2處理速殖子凋亡程度,發(fā)現(xiàn)存在凋亡,隨時(shí)間增大其凋亡程度擴(kuò)大。流式細(xì)胞儀分析速殖子以H2O2處理后DNA含量的變化,發(fā)現(xiàn)H2O2組速殖子數(shù)少,DNA含量降低。測(cè)定H2O2處理速殖子過程中胞漿鈣離子濃度隨著時(shí)間增長(zhǎng)以及處理濃度增高而增高。成功建立剛地弓形蟲RH株速殖子體外培養(yǎng)模型。初步研究發(fā)現(xiàn)H2O2能誘導(dǎo)弓形蟲速殖子凋亡及其過程中胞漿鈣離子濃度升高。
【關(guān)鍵詞】：弓形蟲 凋亡 過氧化氫
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R382.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要內(nèi)容中英文縮寫11-13
• 第1章 緒論13-19
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料19-25
• 2.1 主要儀器19-20
• 2.2 蟲體，小鼠及細(xì)胞株20
• 2.3 主要試劑盒20
• 2.4 主要試劑20-21
• 2.5 試劑配制21-22
• 2.6 生物信息學(xué)軟件22-23
• 2.7 其它23-25
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法25-33
• 3.1 弓形蟲速殖子培養(yǎng)模型的建立25-28
• 3.1.1 速殖子的復(fù)蘇以及傳種25
• 3.1.2 速殖子小鼠體內(nèi)的傳代25-26
• 3.1.3 速殖子液氮保種26
• 3.1.4 RAW264.7 細(xì)胞系復(fù)蘇、傳代及保種26-27
• 3.1.5 弓形蟲速殖子毒力的檢測(cè)27
• 3.1.6 在 RAW264.7細(xì)胞內(nèi)弓形蟲速殖子連續(xù)傳代保種27-28
• 3.2 弓形蟲速殖子的純化28-29
• 3.3 過氧化氫誘導(dǎo)弓形蟲凋亡檢測(cè)29-31
• 3.3.1 DNA瓊脂糖凝膠電泳29
• 3.3.2 弓形蟲速殖子凋亡吉姆薩染色形態(tài)學(xué)觀察29-30
• 3.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)弓形蟲速殖子凋亡率30
• 3.3.4 弓形蟲速殖子DNA含量的測(cè)定30
• 3.3.5 凋亡過程中胞漿游離鈣濃度的測(cè)定30-31
• 3.4 統(tǒng)計(jì)分析31-33
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-43
• 4.1 弓形蟲速殖子的體內(nèi)培養(yǎng)及毒力檢測(cè)33
• 4.2 弓形蟲速殖子的體外培養(yǎng)及毒力檢測(cè)33-34
• 4.3 兩種孔徑濾膜純化速殖子結(jié)果比較34-35
• 4.4 弓形蟲速殖子凋亡的DNA瓊脂糖凝膠電泳35-36
• 4.5 弓形蟲速殖子凋亡的吉姆薩染色36-37
• 4.6 H_2O_2對(duì)弓形蟲速殖子凋亡程度的時(shí)間影響37-38
• 4.7 H_2O_2對(duì)弓形蟲凋亡過程中DNA含量的變化38-40
• 4.8 H_2O_2誘導(dǎo)速殖子凋亡過程中游離鈣變化40-43
• 第5章 討論43-49
• 第6章 結(jié)論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 綜述57-63
• 參考文獻(xiàn)61-63
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果63-65
• 本研究受以下基金資助65-67
• 致謝67

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1 楊秀珍,楊樹森,吳增強(qiáng),王文實(shí),郭小紅;弓形蟲RH株速殖子在體外形成包囊的觀察[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報(bào);1996年02期

2 楊小迪;陳興智;王媛媛;常雪蓮;徐軍;程啟媛;胡守鋒;孫新;;ERK1/2信號(hào)途徑與弓形蟲侵入細(xì)胞及胞內(nèi)增殖關(guān)系的研究[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2011年03期

3 蔡亮,楊秋林,許麗芳,梁麗紅,伍和平,陳陽勤,王北冰,沈元瓊;鼠巨噬細(xì)胞培養(yǎng)弓形蟲RH株速殖子的實(shí)驗(yàn)研究[J];南華大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年01期

4 沈繼龍,龜井喜世子;組織內(nèi)弓形蟲病原體的分離純化[J];中國(guó)人獸共患病雜志;1991年05期

5 徐麟鶴,王裕發(fā),陳聚梁,徐志翔,陶賢梅;剛地弓形蟲速殖子超微結(jié)構(gòu)觀察[J];中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1988年S1期

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7 孫新;剛地弓形蟲細(xì)胞培養(yǎng)的研究Ⅲ．不同毒力株速殖子培養(yǎng)檢出時(shí)間的差異[J];中國(guó)寄生蟲病防治雜志;1995年02期

8 劉俊燕,楊秀珍,吳增強(qiáng),楊樹森;弓形蟲慢性感染鼠形成包囊的實(shí)驗(yàn)研究[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年02期

9 徐麟鶴,王裕發(fā),陳聚梁,徐志翔,俞永富,陶賢梅;剛地弓形蟲速殖子的超微結(jié)構(gòu)[J];中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1989年02期

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本文編號(hào)：420477