目的:自在原核生物中發(fā)現(xiàn)線性質粒以來,對于線性質粒的探索一度成為原核生物研究的熱點,其作為獨立于染色體基因組外的遺傳單位,在細菌耐藥性及致病方面發(fā)揮了重要作用。質粒p BSSB1是目前為止在傷寒沙門菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)中發(fā)現(xiàn)的唯一的一種線性質粒。本課題組對線性質粒p BSSB1其上兩個基因的功能展開研究,進一步探索該線性質粒在傷寒沙門菌中所發(fā)揮的作用。方法:1.傷寒沙門菌LP002、LP008基因高表達菌株、缺陷株及異源表達菌株的構建。構建p BAD-LP008重組載體,鑒定正確后,用陽性重組質粒和空質粒電擊轉化傷寒沙門菌野生株(S.Typhi GIFU10007),作為LP008基因高表達菌株(WT-LP008)和空質粒對照株(WT-p BAD);陽性質粒及空載體電轉化S.Typhi Ty2感受態(tài)作為LP008基因異源表達株(Ty2-LP008)及異源表達對照株(Ty2-p BAD)。LP008及LP002基因缺陷株的制備則是將同源重組片段連接于自殺質粒p GMB151,將陽性質粒電擊轉化入野生株后利用蔗糖平板篩選最終...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫索引
1 緒論
    1.1 傷寒沙門菌簡介
    1.2 原核生物線性質粒的發(fā)現(xiàn)及作用
    1.3 線性質粒pBSSB1的研究現(xiàn)狀
    1.4 本論文研究內容
2 研究目的、技術路線、材料方法
    2.1 研究目的
    2.2 技術路線
        2.2.1 LP008、LP002基因功能的初步預測
        2.2.2 LP008基因研究技術路線
        2.2.3 LP002基因研究技術路線
    2.3 實驗材料
        2.3.1 菌株和質粒
        2.3.2 主要試劑和材料
        2.3.3 主要溶液
        2.3.4 主要儀器
    2.4 實驗方法
        2.4.1 傷寒沙門菌LP008、LP002蛋白結構域預測
        2.4.2 傷寒沙門菌LP008基因相關實驗方法
            2.4.2.1 傷寒沙門菌LP008基因相關菌株的構建
            2.4.2.2 LP008基因高表達菌株的生長曲線測定
            2.4.2.3 LP008基因高表達菌株的動力試驗
            2.4.2.4 LP008基因高表達菌株的生物膜試驗
            2.4.2.5 LP008基因高表達菌株的上皮細胞侵襲試驗
            2.4.2.6 LP008基因高表達菌株的qRT-PCR
            2.4.2.7 LP008重組蛋白的純化及獲取
            2.4.2.8 凝膠阻滯試驗
            2.4.2.9 基因芯片
        2.4.3 傷寒沙門菌LP002基因相關實驗方法
            2.4.3.1 LP002缺陷變異株的構建
            2.4.3.2 LP002缺陷株的生長曲線測定
            2.4.3.3 LP002缺陷株的動力試驗
            2.4.3.4 LP002缺陷株的上皮細胞侵襲試驗
            2.4.3.5 LP002缺陷株的巨噬細胞胞內試驗
3 實驗結果
    3.1 傷寒沙門菌LP008、LP002蛋白結構域預測
    3.2 傷寒沙門菌LP008基因相關實驗結果
        3.2.1 傷寒沙門菌LP008基因相關菌株的構建
        3.2.2 LP008基因對生長情況的影響
        3.2.3 LP008基因高表達菌株的動力試驗
        3.2.4 LP008基因高表達菌株的生物膜試驗
        3.2.5 LP008基因高表達菌株的上皮細胞侵襲試驗
        3.2.6 LP008基因高表達菌株的qRT-PCR
        3.2.7 LP008重組蛋白的純化及獲取
        3.2.8 凝膠阻滯試驗
        3.2.9 基因芯片
    3.3 傷寒沙門菌LP002基因相關實驗結果
        3.3.1 LP002缺陷變異株的構建
        3.3.2 LP002基因對生長情況的影響
        3.3.3 LP002基因缺陷變異株的動力試驗
        3.3.4 LP002基因缺陷變異株的上皮細胞侵襲試驗
        3.3.5 LP002基因缺陷變異株的巨噬細胞胞內存活試驗
4 討論
    4.1 LP008基因功能
        4.1.1 LP008基因對S. Typhi動力、生物膜、侵襲力的調節(jié)
        4.1.2 LP008基因調控機制
    4.2 LP002基因功能
5 主要結論及展望
    5.1 主要結論
    5.2 展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文及學術交流



本文編號：4041324