發(fā)布時間：2025-04-18 06:21

　　目的:衰老是由多種因素造成的一種生物現(xiàn)象,其特點是炎癥反應增加,機體整體適應能力下降。衰老與多種器官系統(tǒng)性生理衰退有關(guān),其中包括心血管系統(tǒng)。老年人群中,衰老相關(guān)的心血管疾病的發(fā)病率大幅度上升。在衰老過程中活性氧含量增加,因此本實驗的目的就是通過在體外用H2O2處理心肌細胞,模擬體內(nèi)氧化應激環(huán)境,并利用衰老鼠模型研究炎癥在衰老中的作用,同時探究間充質(zhì)干細胞來源的外泌體(UMSC-Exo)通過Lnc RNA MALAT1對炎癥和衰老的調(diào)控作用。我們的研究將通過抑制炎癥反應為減緩衰老以及治療衰老相關(guān)的心臟疾病提供一種新的治療策略。方法:我們選用大鼠心肌細胞系(H9C2)和衰老鼠作為研究對象。1、心肌細胞經(jīng)H2O2處理后,通過檢測炎癥因子TNF-α,衰老基因p21的表達變化,以及通過β-半乳糖苷酶染色,研究氧化應激對心肌細胞中炎癥反應和細胞衰老的影響;2、通過檢測NF-κB的活性及其亞蛋白p-p65的表達變化,研究氧化應激,IKKβ的特異性抑制劑IMD-0354,si IKKβ以及UMSC-Exo對NF-κB信號通路的影響;3、對H9C2細胞進行H2O2處理前,用IMD-0354或UMSC-Ex...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 引言
第二章 材料與方法
    1 材料
        1.1 細胞系和實驗動物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要抗體
        1.4 主要儀器設備
    2 實驗方法
        2.1 細胞培養(yǎng)和傳代
        2.2 細胞處理
        2.3 流式細胞術(shù)
        2.4 WesternBlot
        2.5 qRT-PCR
        2.6 細胞核質(zhì)分離實驗
        2.7 NF-κB啟動子-熒光素酶實驗
        2.8 siRNA的轉(zhuǎn)染實驗
        2.9 ELISA實驗
        2.10 PKH26標記UMSC-Exo實驗
        2.11 β-半乳糖苷酶染色實驗
        2.12 成像流式細胞儀實驗
        2.13 MALAT1結(jié)構(gòu)預測
        2.14 p65蛋白結(jié)構(gòu)預測
        2.15 動物實驗
        2.16 數(shù)據(jù)分析
第三章 結(jié)果
    1 建立心肌細胞衰老模型
        1.1 心肌細胞衰老模型的建立
        1.2 衰老對炎癥反應的影響
        1.3 衰老對細胞凋亡的影響
        1.4 衰老對NF-κB信號通路的影響
        1.5 衰老對總p65和p-p65s536核轉(zhuǎn)移的影響
    2 IMD-0354對心肌細胞衰老的影響
        2.1 IMD-0354對心肌細胞炎癥和凋亡的影響
        2.2 IMD-0354對心肌細胞衰老的影響
    3 siIKKβ對心肌細胞衰老的影響
        3.1 siIKKβ對NF-κB信號通路的影響
        3.2 siIKKβ對心肌細胞炎癥和凋亡的影響
        3.3 siIKKβ對心肌細胞衰老的影響
    4 UMSC-Exo對心肌細胞衰老的影響
        4.1 UMSC-Exo對心肌細胞衰老和炎癥的影響
        4.2 UMSC-Exo對心肌細胞凋亡和增殖的影響
    5 UMSC-Exo對心臟衰老的影響
        5.1 檢測衰老過程中p21和TNF-α的表達
        5.2 尾靜脈注射的UMSC-Exo在體內(nèi)的駐留情況
        5.3 UMSC-Exo對心臟衰老的影響
        5.4 UMSC-Exo對心臟中炎癥的影響
    6 UMSC-Exo中LncRNAMALAT1對細胞衰老的影響
        6.1 MALAT1在UMSC及UMSC-Exo中的表達
        6.2 MALAT1在UMSC中的亞細胞定位
        6.3 MALAT1在心肌細胞中的表達及亞細胞定位
        6.4 檢測MALAT1的沉默效率
        6.5 MALAT1對細胞衰老過程中炎癥的影響
        6.6 MALAT1對心肌細胞衰老的影響
        6.7 MALAT1對NF-κB信號通路的影響
    7 UMSC-Exo中LncRNAMALAT1對心臟衰老的影響
        7.1 檢測衰老過程中MALAT1的表達
        7.2 MALAT1對心臟衰老和炎癥的影響
        7.3 MALAT1對心臟功能的影響
    8 MALAT1調(diào)控炎癥反應的機制圖
第四章 討論
第五章 結(jié)論
    1 結(jié)論
    2 創(chuàng)新點
    3 后續(xù)研究展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間公開發(fā)表論文
文中主要縮略詞表
致謝



本文編號：4040672