本文關(guān)鍵詞：問號鉤端螺旋體colA基因產(chǎn)物膠原酶活性及其致病機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的了解不同問號鉤端螺旋體(簡稱鉤體)血清群colA基因分布和序列保守性、表達(dá)產(chǎn)物膠原酶活性以及感染細(xì)胞時colA基因表達(dá)水平變化和產(chǎn)物分泌情況。方法采用PCR及其產(chǎn)物測序法檢測我國主要流行的7個問號鉤體血清群代表株中colA基因并了解其序列保守性。構(gòu)建問號鉤體黃疸出血群賴型賴株colA基因原核表達(dá)系統(tǒng),Ni-NTA親和層析法提取表達(dá)的目的重組蛋白rColA。采用分光光度法檢測rColA水解I~IV型天然膠原蛋白及Azocoll和Pz-肽合成底物能力并測定其Km和Kcat值。采用實(shí)時熒光定量RT-PCR和Western Blot分別檢測問號鉤體賴株感染HUVEC、BEAS-2B、L-02、HEK293細(xì)胞時colA-mRNA水平變化及ColA分泌情況。結(jié)果不同血清群問號鉤體均能擴(kuò)增出全長colA基因片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性高達(dá)99.4%~100%。所構(gòu)建的colA基因表達(dá)系統(tǒng)能有效表達(dá)rColA。rColA能不同程度地水解上述6種底物,但水解III型膠原蛋白能力最強(qiáng)(P0.05),其Km和Kcat值分別為2.16mg/mL和35.6h-1。問號鉤體賴株感染各靶細(xì)胞時colA-mRNA水平顯著升高(P0.01),問號鉤體-細(xì)胞共培養(yǎng)物上清中可檢出ColA。結(jié)論問號鉤體colA基因?yàn)樾蛄斜Ｊ�、分布廣泛的膠原酶編碼基因,感染細(xì)胞時該基因產(chǎn)物表達(dá)上調(diào)并外分泌,從而在問號鉤體感染宿主過程中發(fā)揮實(shí)際作用。
【作者單位】： 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科;浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 問號鉤端螺旋體 colA基因 膠原酶 表達(dá) 分泌
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81261160321和81171534) 浙江省自然科學(xué)基金(LQ14H190001)~~
【分類號】：R377.5
【正文快照】： 致病性鉤端螺旋體(簡稱鉤體)感染引起的鉤體病是全球流行的人獸共患傳染病[1]。致病性鉤體有7個基因種(genospecies),但以問號鉤體(Leptospi-ra interrogans)流行最廣[1-3]。動物感染問號鉤體后癥狀輕微,但可持續(xù)從尿液排出鉤體污染水源和土壤,人接觸疫水或疫土后均發(fā)病[3-4]

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