發(fā)布時間：2017-05-28 21:13

  本文關(guān)鍵詞：紅斑丹毒絲菌C43065株甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因的克隆與表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的克隆和表達(dá)紅斑丹毒絲菌甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因。方法采用PCR從紅斑丹毒絲菌C43065株基因組中擴(kuò)增編碼GAPDH的gapC基因片段,將其克隆至原核表達(dá)載體pET32a(+)的BamHⅠ和KpnⅠ多克隆位點(diǎn)上,構(gòu)建重組載體pET32a-gapC,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)N端帶有Trx的重組蛋白GapC,用SDS-PAGE和Western blot檢測表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)果擴(kuò)增得到的C43065株gapC基因片段大小為1 005bp,與已報(bào)道的紅斑丹毒絲菌Fujisawa株gapC基因核苷酸序列的同源性為99%。SDS-PAGE結(jié)果顯示表達(dá)蛋白分子質(zhì)量單位約為57ku,與預(yù)期的大小相近。Western blot檢測結(jié)果顯示表達(dá)的重組蛋白GapC能與抗6個組氨酸標(biāo)簽鼠單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)。結(jié)論用大腸埃希菌表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)GapC蛋白,可用于紅斑丹毒絲菌GapC生物學(xué)功能的進(jìn)一步研究。
【作者單位】： 伊犁師范學(xué)院生物與地理科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 紅斑丹毒絲菌 甘油醛--磷酸脫氫酶 基因克隆 原核表達(dá)
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31360613;31072142)
【分類號】：R378
【正文快照】： ***紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)是引起豬丹毒、禽類敗血癥、人類丹毒、魚類臟器出血和腎臟病變等疾病的重要致病菌,給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p失,亦給食品衛(wèi)生和人體健康帶來威脅[1]。紅斑丹毒絲菌有16種血清型(1a、1b、2、4、5、6、8、9、11、12、15、16、17、19、2

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本文編號：403493