目的探討糖尿病小鼠(db/db)血清外泌體在體外培養(yǎng)的H9C2心肌細(xì)胞損傷中的作用及機(jī)制。方法采用db/db小鼠(n=10)及其對(duì)照組小鼠(db/+,n=5)制備糖尿病心肌損傷小鼠模型。提取小鼠血清中的外泌體,定量檢測(cè)其數(shù)量并應(yīng)用PKH26標(biāo)記為紅色熒光;采用Western blotting檢測(cè)外泌體相關(guān)蛋白及外泌體刺激后H9C2細(xì)胞炎性因子的表達(dá)情況;采用TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;采用Rab1a中和抗體進(jìn)行阻斷實(shí)驗(yàn)。結(jié)果 db/db小鼠血清外泌體數(shù)量(30.95×109/ml)明顯多于db/+小鼠(10.45×109/ml),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。體外培養(yǎng)的H9C2細(xì)胞能夠內(nèi)吞更多db/db小鼠血清來(lái)源的外泌體;應(yīng)用db/db小鼠血清外泌體干預(yù)H9C2細(xì)胞可以刺激細(xì)胞炎性因子表達(dá)明顯增加,其中IL-6和IL-1β分別增加6.2倍和2.6倍(P<0.01),且H9C2細(xì)胞凋亡明顯增多。進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),Rab1a在db/db小鼠血清外泌體中的表達(dá)明顯增多,應(yīng)用Rab1a中和抗體阻斷db/db小鼠外泌體中Rab1a表達(dá)后可明顯抑制H9C2細(xì)胞對(duì)外泌體的內(nèi)吞及細(xì)...

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 血清外泌體的分離
    1.3 外泌體的定量檢測(cè)
    1.4 外泌體標(biāo)記分析
    1.5 細(xì)胞系及細(xì)胞培養(yǎng)
    1.6 中和抗體處理
    1.7 外泌體內(nèi)吞情況檢測(cè)
    1.8 TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況
    1.9 We s t e r n b l o t t i n g檢測(cè)外泌體、炎癥因子及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
    1.1 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 db/db糖尿病小鼠外泌體的分泌情況
    2.2 H9C2細(xì)胞對(duì)db/db小鼠外泌體的內(nèi)吞作用
    2.3 外泌體誘導(dǎo)H9C2細(xì)胞炎性因子表達(dá)及細(xì)胞凋亡情況
    2.4 內(nèi)吞調(diào)控相關(guān)蛋白的表達(dá)
    2.5 Rab1a中和抗體對(duì)db/db小鼠血清外泌體內(nèi)吞及H9C2細(xì)胞凋亡的抑制作用
3 討論



本文編號(hào)：4019024