目的原核表達(dá)剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）微線蛋白16（micronemal protein 16,Tg MIC16）的3個(gè)基因片段,并分析3個(gè)重組蛋白的免疫反應(yīng)性。方法參照Gen Bank中Tg MIC16基因序列,根據(jù)功能活性區(qū)將其分為3個(gè)片段（M16D1、M16D2、M16D3）,分別設(shè)計(jì)引物,以剛地弓形蟲RH株速殖子RNA為模板,通過RT-PCR擴(kuò)增,獲得預(yù)期的3個(gè)DNA片段,雙酶切后連接至原核表達(dá)載體p ET-32a（+）,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌（Escherichia coli）TOP10,經(jīng)PCR、雙酶切篩選陽性質(zhì)粒,測(cè)序確認(rèn)后轉(zhuǎn)化至E.coli Rosetta,經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá),十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物。重組蛋白經(jīng)鎳柱純化后,分別以抗組氨酸（His）單抗和弓形蟲感染兔血清為一抗,Western blotting分析其免疫反應(yīng)性。結(jié)果 Tg MIC16 3個(gè)基因片段的RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物分別為1 806、1 290、855 bp。雙酶切和測(cè)序結(jié)果顯示,3個(gè)Tg MIC16片段...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蟲株、菌株與質(zhì)粒載體
    1.2 主要試劑
    1.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
    1.4 Tg MIC16基因的分段擴(kuò)增
    1.5 原核表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化
    1.6 重組蛋白的分段誘導(dǎo)表達(dá)
    1.7 重組蛋白的純化
    1.8 Western blotting分析
2 結(jié)果
    2.1 Tg MIC16 PCR擴(kuò)增結(jié)果
    2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
    2.3 重組蛋白的SDS-PAGE分析
    2.4 重組蛋白的純化
    2.5 重組蛋白的Western blotting分析
3 討論



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