通過真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)CD47胞外區(qū)融合蛋白,并免疫新西蘭兔,制備多克隆抗體。構(gòu)建CD47胞外區(qū)真核表達(dá)質(zhì)粒pCHO1.0-CD47-mFc,轉(zhuǎn)染CHO-S細(xì)胞,建立高效表達(dá)CD47胞外區(qū)融合蛋白的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞庫,并表達(dá)CD47胞外區(qū)融合蛋白,通過protein G親和色譜法純化,SDS-PAGE和Western Blot方法進(jìn)行鑒定,Fortebio測(cè)定蛋白濃度。結(jié)果顯示,獲得的CHO-S-CD47-mFc細(xì)胞庫的表達(dá)量在322 mg/L,純化后蛋白純度大于92%,表達(dá)的CD47-mFc融合蛋白可同CD47抗體特異性結(jié)合;將此CD47-mFc蛋白免疫新西蘭兔,多克隆抗血清的效價(jià)達(dá)到1∶102 400。

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