目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)衍生的細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(Adipose stem cells,ADSCs)增殖及多向分化能力的影響。方法:制備BMSCs衍生的ECM材料(BM-dECM),利用H&E染色、免疫熒光染色以及DNA檢測方法對BM-dECM進(jìn)行表征。將ADSCs分別接種于BM-dECM包被的培養(yǎng)皿以及空白培養(yǎng)皿中,利用細(xì)胞計數(shù)試劑盒(CCK-8)檢測兩組ADSCs的增殖能力;利用RT-PCR檢測兩組ADSCs成骨、成脂以及成軟骨分化相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果:H&E染色結(jié)果顯示BM-dECM呈連續(xù)的膜狀結(jié)構(gòu),細(xì)胞核被大部分脫除;免疫熒光染色顯示BM-dECM保留了BMSCs分泌的細(xì)胞外基質(zhì)成分;DNA含量檢測證明脫細(xì)胞后ECM中DNA含量下降為17. 72±3. 24ng/μl;CCK-8檢測顯示,與對照組相比BM-dECM顯著促進(jìn)ADSCs增殖;RT-PCR結(jié)果顯示BM-dECM在一定程度上促進(jìn)了ADSCs成骨分化相關(guān)基因的表達(dá),抑制了成脂以及成軟骨相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)論:BM-dECM可以有效...

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【部分圖文】：

對BM-dECM材料進(jìn)行H&E染色結(jié)果顯示，BM-dECM材料結(jié)構(gòu)良好，藍(lán)紫色的細(xì)胞核已經(jīng)被大部分脫除，粉色的細(xì)胞外基質(zhì)成分得以保留(圖1)。通過此種脫細(xì)胞方法處理所得的BM-dECM呈一層均勻且致密的形貌，保持了連續(xù)的膜狀形態(tài)。2.1.2免疫熒光染色結(jié)果

使用Fibronectin、CollagenI、CollagenIV抗體對BM-dECM材料進(jìn)行免疫熒光染色，BM-dECM材料中纖連蛋白和膠原纖維結(jié)構(gòu)清晰可見(圖2)，證明所制備的BM-dECM很好地保留了BMSCs分泌的細(xì)胞外基質(zhì)中的纖維蛋白和蛋白多糖等成分，可以仿生細(xì)胞....

DNA定量檢測結(jié)果顯示未進(jìn)行脫細(xì)胞處理的細(xì)胞片中DNA含量為73.96±10.20ng/μl，脫細(xì)胞后BM-dECM材料中DNA的量下降為17.72±3.24ng/μl，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(圖3)，極大的降低了BM-dECM材料的免疫原性。結(jié)合H&E染色結(jié)果證實(shí)....

CCK-8檢測結(jié)果顯示：BM-dECM組和對照組中ADSCs細(xì)胞數(shù)量都隨著時間增加而呈現(xiàn)不斷增加的趨勢。第1天時兩組間OD值沒有差異(P>0.05)；隨后3、5、7天均檢測到BM-dECM組的OD值要高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(圖4)。結(jié)果表明BM-dECM材....

本文編號：4009180