本文關(guān)鍵詞：艱難梭菌毒素A原核表達(dá)及重組蛋白純化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建艱難梭菌(Clostridium difficile,C.difficile)毒素A羧基末端原核表達(dá)載體,優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)條件及純化重組蛋白。方法利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增C.difficile毒素A羧基末端基因序列,并將此序列轉(zhuǎn)入pET-28b載體,構(gòu)建pET-28b-tcdA重組表達(dá)載體,并將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)感受態(tài)大腸埃希菌細(xì)胞中,分別在不同條件下進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),獲得最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件后進(jìn)行大量表達(dá),最后用Ni柱對(duì)重組蛋白進(jìn)行親和純化,得到純化后的重組蛋白。結(jié)果成功構(gòu)建了pET-28b-tcdA重組表達(dá)載體,其重組蛋白表達(dá)最佳誘導(dǎo)條件:菌液吸光度值取0.6、溫度取25℃、IPTG終濃度取1.0mmol/L、誘導(dǎo)時(shí)間取10h。蛋白純化咪唑磷酸鹽洗脫液最佳濃度取200mmol/L。結(jié)論成功構(gòu)建pET-28b-tcdA重組表達(dá)載體,在大腸埃希菌BL21(DE3)中可以有效表達(dá),并獲得高濃度重組蛋白,為進(jìn)一步制備TcdA適配子奠定了一定實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)金域檢驗(yàn)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 艱難梭菌毒素A 原核表達(dá) 重組蛋白純化
【基金】：廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目書(201510010241)
【分類號(hào)】：R378.8
【正文快照】： 艱難梭菌(Clostridium difficile,C.diffi-cile)產(chǎn)生的毒素A和B是其引起艱難梭菌相關(guān)感染(Clostridium difficile-associated infection,CDI)的物質(zhì)基礎(chǔ),兩種毒素分別由位于C.dif-ficile致病性決定區(qū)的兩個(gè)染色體基因tcdA與tcdB編碼[1],這兩種毒素均是單葡萄糖轉(zhuǎn)移酶,有著相似

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊道理,李保昌;蛋白質(zhì)純化的方法選擇[J];實(shí)用醫(yī)藥雜志;2004年12期

2 李秀英,賴延?xùn)|,夏良平,曾宗淵,張海濤,馮哲玲,李民友,朱振宇;人顆粒酶B基因的克隆、蛋白純化及表達(dá)分析[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2004年06期

3 李p，

本文編號(hào)：398489