目的：研究在結(jié)核分枝桿菌（MTB）感染肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（AECⅡ）過程中，p53和NF-κB信號通路中相關(guān)信號分子是否參與了抗結(jié)核的先天免疫調(diào)控。方法：利用實(shí)時熒光定量PCR、Western blot和蛋白芯片技術(shù)，通過過表達(dá)和抑制AECⅡ細(xì)胞中的p53和NF-κB基因，分析在牛結(jié)核分枝桿菌弱毒株卡介苗（BCG）感染過程中p53和NF-κB信號通路的信號分子和細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)變化，并探討p53與NF-κB信號通路在AECⅡ細(xì)胞抗MTB感染免疫應(yīng)答中的“cross-talk”關(guān)系。結(jié)果：在A549細(xì)胞中，p53信號通路通過p53協(xié)同CBP來負(fù)調(diào)控NF-κB、TLR-4及TRAF6的表達(dá)，從而抑制NF-κB信號通路的活化，并上調(diào)IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ的表達(dá)；而NF-κB信號通路通過NF-κB協(xié)同TLR-4、TRAF6與CBP來負(fù)調(diào)控p53與MDM2的表達(dá)，從而抑制p53信號通路的激活，同時上調(diào)了IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ的表達(dá)。當(dāng)BCG感染A549細(xì)胞時，p53信號通路中p53協(xié)同MDM2負(fù)調(diào)控CBP，進(jìn)而上調(diào)NF-κB信號通路的TLR-4和TRAF6...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 試劑
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    1.2 方法
        1.2.1 菌種與細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 MTB感染A549細(xì)胞模型
        1.2.3 p53和NF-κB基因過表達(dá)/干擾A549細(xì)胞模型建立
            1.2.3. 1 p53基因
            1.2.3. 2 NF-κB基因
            1.2.4q PCR分析
        1.2.5 Western blot分析
        1.2.6 炎癥因子的蛋白定量芯片分析
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 p53和NF-κB干擾/過表達(dá)A549細(xì)胞模型的建立
    2.2 MTB感染A549細(xì)胞后p53/NF-κB信號通路基因m RNA表達(dá)分析
        2.2.1 p53基因過表達(dá)/干擾的A549細(xì)胞m RNA表達(dá)分析
        2.2.2 NF-κB基因過表達(dá)/干擾的A549細(xì)胞m RNA表達(dá)分析
    2.3 MTB感染A549細(xì)胞后p53/NF-κB信號通路分子的蛋白表達(dá)分析
        2.3.1 p53基因過表達(dá)/干擾的A549細(xì)胞蛋白表達(dá)分析
        2.3.2 A549細(xì)胞NF-κB基因過表達(dá)/干擾后蛋白的表達(dá)分析
    2.4 MTB感染基因過表達(dá)/干擾A549細(xì)胞后炎癥因子的蛋白芯片分析
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