發(fā)布時間：2024-03-09 04:07

　　目的觀察組蛋白去甲基化酶抑制劑反苯環(huán)丙胺(tranylcypromine,TCP)對CD4+T細胞Th1/Th2分化的影響,分析賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1(Lysine-specific demethylase1, LSD1)在其中的作用,探討TCP在調控Th1/Th2分化平衡中的作用及機制。 方法1.收集并分離22例健康人外周血單核細胞,免疫磁珠法純化CD4+T細胞,經(jīng)抗CD3單抗聯(lián)合抗CD28單抗刺激活化后,加入不同濃度TCP(10、30、50、80、100nM)作用,用CFSE法檢測細胞增殖能力：Annexin/PI流式細胞術檢測細胞凋亡率：CD4-PerCP-Cy5.5/IFN-γ-FITC/IL-4-PE三色流式細胞術檢測細胞內細胞因子IFN-γ、IL-4的表達情況；用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和實時熒光定量PCR (RQ-PCR)檢測不同濃度TCP對CD4+T細胞IFN-γ、IL-4、T-bet mRNA表達的影響；ELISA檢測IFN-γ的含量；Western blot觀察T-bet、STAT1、pSTATl蛋白表達情況。向極化培養(yǎng)的Th1細胞和Th2細胞中...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 課題來源、研究的目的和意義
    1.2 國內外研究概況
        1.2.1 國外研究概況
        1.2.2 國內研究概況
    1.3 論文的主要研究內容
第二章 材料與方法
    2.1 研究資料及儀器設備
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 主要儀器與試劑
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要試劑的配置
    2.2 實驗流程與方法
第三章 結果
    3.1 TCP對CD4⁺T細胞增殖的影響
        3.1.1 細胞分選后的純度與活性
            3.1.1.1 流式細胞術檢測分選前后的細胞純度
            3.1.1.2 臺盼藍排斥試驗檢測分選前后的細胞活性
        3.1.2 CFSE試驗檢測TCP對CD4⁺T細胞增殖的影響
    3.2 TCP對CD4⁺T細胞凋亡的影響
    3.3 不同濃度TCP對Th1/Th2分化的影響
    3.4 TCP對CD4⁺T細胞IFN-γ、IL-4 mRNA表達的影響
    3.5 ELISA檢測培養(yǎng)上清中IFN-γ的水平
    3.6 TCP對T-bet/STAT1信號轉導通路的影響
        3.6.1 TCP對Thl型特異轉錄因子T-bet mRNA表達的影響
        3.6.2 TCP對T-bet、STAT1、pSTAT1蛋白表達的影響
        3.6.3 TCP對極化培養(yǎng)Th細胞的STAT1、pSTAT1表達的影響
    3.7 LSD1對Th細胞分化的影響
        3.7.1 TCP對LSD1作用的影響
        3.7.2 轉染LSD1shRNA干擾LSD1的表達
        3.7.3 降低LSD1活性或干擾LSD1表達對Th1特異性細胞因子及轉錄調控子表達的影響
第四章 討論
第五章 結論
參考文獻
英文縮寫詞表
綜述
    綜述參考文獻
在攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文與參加的項目
    A：在國內外刊物上發(fā)表的論文
    B：所參加的項目
致謝



本文編號：3922874