本文關(guān)鍵詞：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞混合培養(yǎng)后成骨分化能力的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSC)共培養(yǎng)后對(duì)干細(xì)胞成骨能力的影響。方法:采用貼壁篩選法和酶消化發(fā)分別獲得BMSC和ADSC,用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鑒定。對(duì)兩種細(xì)胞分別進(jìn)行成骨、成脂肪、成軟骨誘導(dǎo),油紅O染色鑒定成脂分化;堿性磷酸酶、茜素紅染色鑒定成骨分化;成軟骨誘導(dǎo)組誘導(dǎo)后由甲苯胺藍(lán)染色鑒定,并用Q-PCR對(duì)SOX9、II型膠原等基因進(jìn)行測(cè)定。而成骨誘導(dǎo)處理分為四組,A組:干細(xì)胞未誘導(dǎo)組;B組:BMSC成骨誘導(dǎo)組;C組:ADSC成骨誘導(dǎo)組;D組:BMSC與ADSC混合成骨誘導(dǎo)組(每組的細(xì)胞密度均為1.0×104/cm2D組BMSC/ADSC=1:1);上述四組分別采用Western-Blot檢測(cè)OCN以及RUNX2等蛋白。另取Wistar大鼠20只,制作骨缺損模型,分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組,對(duì)照組為空白對(duì)照,骨缺損部位不植入任何材料,實(shí)驗(yàn)組將上述成骨誘導(dǎo)處理的4組細(xì)胞植入支架材料后種入大鼠骨缺損處,組織學(xué)方法檢測(cè)缺損處成骨情況。結(jié)果:ADSC和BMSC兩種細(xì)胞在在成脂誘導(dǎo)條件下誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞,油紅O染色可見紅色;成骨誘導(dǎo)條件下細(xì)胞成骨分化,堿性磷酸酶(ALP)以及茜素紅染色可見片狀紅色;成軟骨誘導(dǎo)條件下細(xì)胞成軟骨分化,甲苯胺藍(lán)染色可見藍(lán)色。成骨誘導(dǎo)處理組中,B組和C組細(xì)胞中的OCN和RUNX2蛋白表達(dá)水平顯著高于A組細(xì)胞(P0.05);B組細(xì)胞中的OCN和RUNX2蛋白表達(dá)高于C組(P0.05);D組細(xì)胞中的OCN和RUNX2蛋白表達(dá)較其它三組顯著性升高(P0.01)。兩種干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)后,SOX9、II型膠原等基因表達(dá)明顯增高。將上述四組細(xì)胞植入材料種入體內(nèi)后,分別于一月后、兩月后取出材料進(jìn)行組織學(xué)檢查,發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組1月后均有骨小梁生成、2月后均有板狀骨形成,但是成骨情況分別是混合組大于BMSC組大于ADSC組。結(jié)論:共培養(yǎng)后,兩種細(xì)胞的成骨能力有所增強(qiáng)。成骨細(xì)胞植入支架材料后放入骨缺損模型大鼠體內(nèi),可形成骨小梁結(jié)構(gòu)促進(jìn)骨愈合,混合誘導(dǎo)的細(xì)胞成骨能力較單獨(dú)誘導(dǎo)的強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 流式細(xì)胞術(shù) 共培養(yǎng) 堿性磷酸酶 II型膠原
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-15
• 主要參考文獻(xiàn)13-15
• 材料（資料、內(nèi)容）與方法15-33
• 1 研究?jī)?nèi)容15
• 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和耗材15-18
• 3 實(shí)驗(yàn)方法-原代細(xì)胞培養(yǎng)18-21
• 4 細(xì)胞的鑒定21-22
• 5 細(xì)胞的誘導(dǎo)分化22-23
• 6 細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)23
• 7 RT-PCR23-26
• 8 Western-blot檢測(cè)26-33
• 結(jié)果33-37
• 討論37-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)45-49
• 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物45
• 2 實(shí)驗(yàn)方法45
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-47
• 4 討論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-49
• 綜述49-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果58-59
• 致謝59

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本文編號(hào)：391890