本文關(guān)鍵詞：脂肪間充質(zhì)干細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞混合培養(yǎng)后成骨分化能力的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)和脂肪間充質(zhì)干細胞(ADSC)共培養(yǎng)后對干細胞成骨能力的影響。方法:采用貼壁篩選法和酶消化發(fā)分別獲得BMSC和ADSC,用流式細胞術(shù)進行鑒定。對兩種細胞分別進行成骨、成脂肪、成軟骨誘導(dǎo),油紅O染色鑒定成脂分化;堿性磷酸酶、茜素紅染色鑒定成骨分化;成軟骨誘導(dǎo)組誘導(dǎo)后由甲苯胺藍染色鑒定,并用Q-PCR對SOX9、II型膠原等基因進行測定。而成骨誘導(dǎo)處理分為四組,A組:干細胞未誘導(dǎo)組;B組:BMSC成骨誘導(dǎo)組;C組:ADSC成骨誘導(dǎo)組;D組:BMSC與ADSC混合成骨誘導(dǎo)組(每組的細胞密度均為1.0×104/cm2D組BMSC/ADSC=1:1);上述四組分別采用Western-Blot檢測OCN以及RUNX2等蛋白。另取Wistar大鼠20只,制作骨缺損模型,分為實驗組與對照組,對照組為空白對照,骨缺損部位不植入任何材料,實驗組將上述成骨誘導(dǎo)處理的4組細胞植入支架材料后種入大鼠骨缺損處,組織學(xué)方法檢測缺損處成骨情況。結(jié)果:ADSC和BMSC兩種細胞在在成脂誘導(dǎo)條件下誘導(dǎo)成脂肪細胞,油紅O染色可見紅色;成骨誘導(dǎo)條件下細胞成骨分化,堿性磷酸酶(ALP)以及茜素紅染色可見片狀紅色;成軟骨誘導(dǎo)條件下細胞成軟骨分化,甲苯胺藍染色可見藍色。成骨誘導(dǎo)處理組中,B組和C組細胞中的OCN和RUNX2蛋白表達水平顯著高于A組細胞(P0.05);B組細胞中的OCN和RUNX2蛋白表達高于C組(P0.05);D組細胞中的OCN和RUNX2蛋白表達較其它三組顯著性升高(P0.01)。兩種干細胞成軟骨誘導(dǎo)后,SOX9、II型膠原等基因表達明顯增高。將上述四組細胞植入材料種入體內(nèi)后,分別于一月后、兩月后取出材料進行組織學(xué)檢查,發(fā)現(xiàn)實驗組1月后均有骨小梁生成、2月后均有板狀骨形成,但是成骨情況分別是混合組大于BMSC組大于ADSC組。結(jié)論:共培養(yǎng)后,兩種細胞的成骨能力有所增強。成骨細胞植入支架材料后放入骨缺損模型大鼠體內(nèi),可形成骨小梁結(jié)構(gòu)促進骨愈合,混合誘導(dǎo)的細胞成骨能力較單獨誘導(dǎo)的強。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 脂肪間充質(zhì)干細胞 流式細胞術(shù) 共培養(yǎng) 堿性磷酸酶 II型膠原
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-15
• 主要參考文獻13-15
• 材料（資料、內(nèi)容）與方法15-33
• 1 研究內(nèi)容15
• 2 實驗動物和耗材15-18
• 3 實驗方法-原代細胞培養(yǎng)18-21
• 4 細胞的鑒定21-22
• 5 細胞的誘導(dǎo)分化22-23
• 6 細胞染色實驗23
• 7 RT-PCR23-26
• 8 Western-blot檢測26-33
• 結(jié)果33-37
• 討論37-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-45
• 體內(nèi)實驗45-49
• 1 實驗動物45
• 2 實驗方法45
• 3 實驗結(jié)果45-47
• 4 討論47-48
• 參考文獻48-49
• 綜述49-58
• 參考文獻54-58
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果58-59
• 致謝59

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  本文關(guān)鍵詞：脂肪間充質(zhì)干細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞混合培養(yǎng)后成骨分化能力的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：391890