乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒(Hepatitis B virus, HBV)引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹鞑⒖梢鸲嗥鞴俟δ苷系K的傳染病。HBV感染的動(dòng)物模型為更好的進(jìn)行HBV相關(guān)研究提供有力工具。腺相關(guān)病毒(Adeno-associated virus, AAV)因其宿主廣泛、安全性強(qiáng)、介導(dǎo)外源基因持續(xù)表達(dá)等優(yōu)點(diǎn),作為病毒載體受到廣泛關(guān)注。目前,一種攜帶1.3拷貝HBV基因組的8型腺相關(guān)病毒(rAAV8-1.3HBV)被成功用于建立持續(xù)感染的HBV小鼠模型。本課題以rAAV8-1.3HBV為參照,評價(jià)攜帶1.3拷貝HBV基因組的1型、2型、5型、9型腺相關(guān)病毒(rAAV1-1.3HBV、 rAAV2-1.3HBV、rAAV5-1.3HBV、rAAV9-1.3HBV)建立乙肝小鼠模型的效果。實(shí)驗(yàn)主要包括以下內(nèi)容：(1)準(zhǔn)備所需的5種血清型重組腺相關(guān)病毒,分別為攜帶1.3拷貝HBV基因組的1型、2型、5型、8型、9型腺相關(guān)病毒,采用定量PCR法測定5種病毒滴度。(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將含腺相關(guān)病毒倒轉(zhuǎn)末端重復(fù)序列元件與包含1.3個(gè)拷貝HBV基因組的HBV表達(dá)質(zhì)粒(pAAV-1.3HBV)采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)...

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２?ＡＡＶ包裝示患圖

本部分生產(chǎn)的５種ｒＡＡＶ－１．３ＨＢＶ需要Ｈ種質(zhì)粒，分別為ｐＡＡＶ－ｌＪＨＢＶ，包??裝質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒。ｐＡＡＶ－１．３ＨＢＶＷ包括１４５?ｂｐ的ＡＡＶＩＴＲ序列，１．３拷貝的??ＨＢＶ基因組（圖２－１）；包裝質(zhì)粒包括ＡＡＶ的復(fù)制蛋白（Ｒｅｐ）和外殼蛋白（Ｒｅｐ）；??輔助質(zhì)粒，....

圖２－５?ＡＡＶ基因組示意困??

?北京化工大學(xué)碩±學(xué)位論文???（４）分離膠板，暴露出ＳＤＳ－ＰＡＧＥ膠，棄去積層膠，選用己配置好的考馬斯亮藍(lán)??染色液染色，之后脫色３?ｈ，把凝膠放在凝膠成像系統(tǒng)后Ｉ使用計(jì)算機(jī)中的固定??程序拍照保存。??２．?５．?２點(diǎn)雜交方法測定重組ＡＡＶ病巧巧度??ＣＭＶ后動(dòng)子是病毒基因....

圖２－２?ＡＡＶ包裝示患圖

本部分生產(chǎn)的５種ｒＡＡＶ－１．３ＨＢＶ需要Ｈ種質(zhì)粒，分別為ｐＡＡＶ－ｌＪＨＢＶ，包??裝質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒。ｐＡＡＶ－１．３ＨＢＶＷ包括１４５?ｂｐ的ＡＡＶＩＴＲ序列，１．３拷貝的??ＨＢＶ基因組（圖２－１）；包裝質(zhì)粒包括ＡＡＶ的復(fù)制蛋白（Ｒｅｐ）和外殼蛋白（Ｒｅｐ）；??輔助質(zhì)粒，....

圖２－５?ＡＡＶ基因組示意困??

?北京化工大學(xué)碩±學(xué)位論文???（４）分離膠板，暴露出ＳＤＳ－ＰＡＧＥ膠，棄去積層膠，選用己配置好的考馬斯亮藍(lán)??染色液染色，之后脫色３?ｈ，把凝膠放在凝膠成像系統(tǒng)后Ｉ使用計(jì)算機(jī)中的固定??程序拍照保存。??２．?５．?２點(diǎn)雜交方法測定重組ＡＡＶ病巧巧度??ＣＭＶ后動(dòng)子是病毒基因....

本文編號：3910647