目的開展SmCaMK I(曼氏迭宮絳蟲鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶I)的潛在生物學(xué)特征分析和功能研究。方法利用相關(guān)網(wǎng)站和軟件對(duì)SmCaMK I的同源性核苷酸序列比對(duì)分析、保守位點(diǎn)預(yù)測(cè)、構(gòu)建分子進(jìn)化樹、編碼氨基酸的淋巴細(xì)胞表位進(jìn)行分析預(yù)測(cè)。此外,SmCaMK I進(jìn)行擴(kuò)增,并克隆到表達(dá)載體pET-28α(+)中進(jìn)行蛋白的表達(dá)純化,制備大鼠免疫血清進(jìn)行蟲體免疫組織定位分析。結(jié)果 SmCaMK I是一個(gè)全長(zhǎng)基因,由1 068bp組成,編碼355個(gè)氨基酸。SmCaMK I與細(xì)粒棘球絳蟲、多房棘球絳蟲的CaMK I保守功能域的氨基酸序列一致性分別為89%和88%,與人的CaMK I氨基酸序列一致性僅僅只有44%。分子進(jìn)化樹分析中SmCaMK I與絳蟲屬的親緣關(guān)系最近,與其他物種親緣性較遠(yuǎn)。與人類CaMK I相比,淋巴細(xì)胞表位具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。SmCaMK I能夠定位在成蟲的睪丸和蟲卵,在裂頭蚴中大量表達(dá)和特異定位于體表。結(jié)論SmCaMK I是參與蟲體生長(zhǎng)發(fā)育繁殖的重要蛋白分子,還可能是一個(gè)潛在的疫苗靶標(biāo)蛋白。

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圖１ＳｍＣａＭＫＩ同源氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹Ｆｉｇ．１ＴｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｔｒｅｅｏｆＳｍＣａＭＫＩ

多房棘球絳蟲的ＣａＭＫＩ同源序列屬于同一進(jìn)化分支，證明其親緣關(guān)系最接近；而與人類、鼠類、原核生物分布于不同的分支，在進(jìn)化上說明親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。圖１ＳｍＣａＭＫＩ同源氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹Ｆｉｇ．１ＴｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｔｒｅｅｏｆＳｍＣａＭＫＩ２．３淋巴細(xì)胞表位分析利用Ｂｅｐｉ....

圖２Ｂ淋巴細(xì)胞表位比對(duì)Ｆｉｇ．２ＴｈｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆＢｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｅｐｉｔｏｐｅｓ

７１、ａａ１９５－ａａ１９９、ａａ２０９－ａａ２１９、ａａ２３６－ａａ２４６、ａａ２６２－ａａ２６８、ａａ３５０－ａａ３５５）和５個(gè)Ｔ淋巴細(xì)胞表位（７７ａａ－８５ａａ、９３ａ－１０１ａａ、１７３ａａ－１８１ａａ、１８８ａａ－１９６ａａ、３２７ａａ－３３５ａａ）。將ＳｍＣａＭＫＩ與....

圖３Ｔ淋巴細(xì)胞表位比對(duì)Ｆｉｇ．３ＴｈｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｅｐｉｔｏｐｅｓ

ａａ２６８、ａａ３５０－ａａ３５５）和５個(gè)Ｔ淋巴細(xì)胞表位（７７ａａ－８５ａａ、９３ａ－１０１ａａ、１７３ａａ－１８１ａａ、１８８ａａ－１９６ａａ、３２７ａａ－３３５ａａ）。將ＳｍＣａＭＫＩ與人類ＣａＭＫＩ抗原表位進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，Ｂ細(xì)胞表位重合率較高，但是對(duì)應(yīng)的編碼氨基酸差異較大，并....

圖６ＳｍＣａＭＫＩ蛋白的Ｈｉｓ識(shí)別和抗原性鑒定Ａ為Ｈｉｓ單克隆抗體識(shí)別；Ｂ為ＳｍＣａＭＫＩ蛋白免疫大鼠的免疫血清識(shí)別

ｏｎｏｆＳｍＣａＭＫＩ３討論ＣａＭＫＩ廣泛存在于各組織的細(xì)胞中，作為一個(gè)細(xì)胞內(nèi)級(jí)聯(lián)反應(yīng)的信號(hào)分子［２０］，其對(duì)于下游靶酶的磷酸化和對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控起著重要的作用，主要在細(xì)胞中參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和調(diào)控細(xì)胞增殖。有研究Ａ為Ｈｉｓ單克隆抗體識(shí)別；Ｂ為ＳｍＣａＭＫＩ蛋白免疫大鼠的免疫血清識(shí)別。....

本文編號(hào)：3910833