本文關(guān)鍵詞：1,25-二羥維生素D3對(duì)免疫性血小板減少癥模型小鼠的治療作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)通過觀察并分析1,25-二羥維生素D3對(duì)于成功建立免疫性血小板減少癥(ITP)模型的小鼠的體重、血小板計(jì)數(shù)等各方面的治療作用;以及測量小鼠骨髓來源DC細(xì)胞表面CD80,CD86,MHC II表達(dá)水平,探討1,25-二羥維生素D3治療的作用機(jī)制。為臨床上應(yīng)用1,25-二羥維生素D3治療ITP等自身免疫性疾病,提供了相關(guān)理論基礎(chǔ)。方法1.豚鼠抗小鼠血小板抗血清的制備:取BALB/c小鼠抗凝全血,分離出血小板制成混懸液后分別與等量完全和不完全弗氏佐劑充分混合,分別于第0、1、2、4周注射于豚鼠背部、腹股溝及后足掌皮下免疫。第5周取豚鼠不抗凝全血,離心后獲得上清即為GP-APS。腹腔給予BALB/c小鼠不同比例的GP-APS,觀察血小板下降幅度和持續(xù)時(shí)間,選取合適的稀釋倍數(shù)。2.慢性模型的分組與建立:隨機(jī)將小鼠分為生理鹽水對(duì)照組,ITP模型組和1,25-二羥維生素D3治療組,模型組經(jīng)腹腔給予GP-APS,治療組在模型組的基礎(chǔ)上經(jīng)尾靜脈注射給予100ng/d的1,25-二羥維生素D3,生理鹽水對(duì)照組均給予相同體積的生理鹽水經(jīng)腹腔及尾靜脈注射給藥。在每次給藥后24h采血,測量血小板計(jì)數(shù),并記錄體重,評(píng)價(jià)出血傾向等。于2周后處死小鼠并解剖,取骨髓涂片,鏡下計(jì)數(shù)巨核細(xì)胞數(shù)。3.細(xì)胞培養(yǎng):隨機(jī)從治療組和模型組各取一只BALB/c小鼠,在無菌環(huán)境下取股骨髓腔內(nèi)骨髓,收集后過濾,去除紅細(xì)胞并洗滌兩次。加入無菌完全培養(yǎng)基(其中含GM-CSF 20ng/ml,IL-4 10ng/ml,雙抗及胎牛血清)將收集的細(xì)胞重懸,并按照之前的分組移至6孔培養(yǎng)板中,做上標(biāo)記。4.觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:每天將六孔板放置于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)等變化。5.流式檢測CD86,CD80和MHC II類分子表達(dá):收集第7天細(xì)胞,加入PE-cy5-CD86、FITC-CD80、PE-MHCⅡ,避光條件下室溫孵育30min。洗滌兩次后重懸細(xì)胞,上機(jī)分析。結(jié)果1,25-二羥維生素D3處理后,注射第10天開始,治療組小鼠體重較模型組明顯上升(p0.05),血小板數(shù)較模型組明顯上升(p0.01),出血傾向明顯降低(x20.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1,25-(OH)2D3治療組的DC細(xì)胞表面CD86和MHC II表達(dá)水平較模型組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);CD80的表達(dá)有所降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論1.1,25-(OH)2D3對(duì)ITP模型小鼠在體重飲食等一般情況、出血傾向、血小板數(shù)及骨髓血小板生成等方面表現(xiàn)出一定的治療作用。2.1,25-(OH)2D3有誘導(dǎo)小鼠DC細(xì)胞共刺激分子和MHC II表達(dá)水平下調(diào)的作用,并可能通過該作用抑制DC細(xì)胞的成熟,并從而誘導(dǎo)免疫耐受型DC細(xì)胞。3.1,25-(OH)2D3可能通過誘導(dǎo)免疫耐受型DC細(xì)胞達(dá)到對(duì)ITP模型小鼠的治療作用。
【關(guān)鍵詞】：免疫性血小板減少癥 動(dòng)物模型 1 25-二羥維生素D3 樹突狀細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R558.2;R-332
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 1 前言11-13
• 2 材料和方法13-19
• 3 結(jié)果19-26
• 4 討論26-31
• 5 結(jié)論31
• 6 不足與展望31-33
• 參考文獻(xiàn)33-41
• 附錄41-42
• 致謝42-43
• 綜述43-58
• 參考文獻(xiàn)51-58

【引證文獻(xiàn)】

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 褚雨霆;張雅月;侯麗;馬薇;陳信義;;免疫性血小板減少性紫癜的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第二屆岐黃論壇——血液病中醫(yī)藥防治分論壇論文集[C];2014年

  本文關(guān)鍵詞：1,25-二羥維生素D3對(duì)免疫性血小板減少癥模型小鼠的治療作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：386656