本文關(guān)鍵詞：弓形蟲ROP18激酶抑制宿主NF-κB信號通路的分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)屬于專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,可感染幾乎所有溫血動物。弓形蟲病是一種呈世界性分布并嚴(yán)重危害人類健康的人獸共患寄生蟲病。弓形蟲感染人體多為隱性感染,但在免疫力低下或缺陷的人群如器官移植的病人、長期化療的癌癥患者、AIDS患者等則會出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀。此外,孕期感染可導(dǎo)致胎兒先天性弓形蟲病的發(fā)生。先天性免疫能夠限制弓形蟲的增殖并且可以促進(jìn)宿主產(chǎn)生適應(yīng)性免疫,這也使得蟲體在宿主細(xì)胞內(nèi)長期生存。但是弓形蟲能夠通過抑制感染細(xì)胞的信號通路,進(jìn)而躲避宿主的先天性免疫反應(yīng)。剛地弓形蟲的毒力因子ROP18在抑制宿主細(xì)胞NF-κB信號通路和炎癥因子的釋放中扮演了重要的角色,深入研究ROP18抑制NF-κB的分子機(jī)制具有非常重要的意義。目的：探討Ⅰ型剛地弓形蟲的毒力因子ROP18在抑制宿主細(xì)胞NF-κB信號通路中的分子機(jī)制,為弓形蟲病的發(fā)病機(jī)制、診斷和防治提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。方法：通過酵母雙雜交篩選人胚胎腦庫,發(fā)現(xiàn)宿主NF-κB信號通路的p65蛋白與ROP18具有相互作用。并通過GST pull-down和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)了兩者的相互作用。使用電轉(zhuǎn)的方法將ROP18表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入弓形蟲RH株,構(gòu)建高表達(dá)ROP18的轉(zhuǎn)基因蟲株。將高表達(dá)ROP18的轉(zhuǎn)基因蟲株感染HFF細(xì)胞,通過免疫熒光來檢測ROP18和p65在細(xì)胞中的空間位置。構(gòu)建ROP18缺失突變體的真核表達(dá)質(zhì)粒,通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)了解ROP18對p65功能的影響。用泛素化抗體檢測ROP18是否通過泛素化途徑來促進(jìn)p65的降解。結(jié)果：(1)弓形蟲ROP18和宿主細(xì)胞p65存在相互作用。(這部分內(nèi)容與安然師姐共同完成,為了論文的完整而放在此處。)(2)成功構(gòu)建過表達(dá)ROP18的轉(zhuǎn)基因弓形蟲RH株。(這部分內(nèi)容與安然師姐共同完成,為了論文的完整而放在此處。)(3)弓形蟲ROP18和宿主p65在HFF細(xì)胞內(nèi)有共定位。(4)弓形蟲ROP18促進(jìn)宿主p65的降解。(5)弓形蟲ROP18通過泛素-蛋白酶體依賴的途徑促進(jìn)宿主p65降解。結(jié)論：本研究結(jié)果顯示,弓形蟲ROP18與NF-κB信號通路中的p65蛋白存在相互作用。ROP18蛋白通過泛素-蛋白酶體依賴的途徑來促進(jìn)宿主細(xì)胞p65蛋白的降解,從而抑制宿主NF-κB信號通路。本研究有助于了解弓形蟲免疫逃逸的分子機(jī)制,為弓形蟲病的發(fā)病機(jī)制,免疫診斷以及治療提供理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：弓形蟲 NF-κB信號通路 致病機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R382.5
【目錄】：

• 英文縮略詞對照表5-7
• 中文摘要7-8
• 英文摘要8-11
• 1、前言11-12
• 2、材料與方法12-25
• 3、結(jié)果25-35
• 4、討論35-36
• 5、結(jié)論36
• 6.本研究的創(chuàng)新點(diǎn)36
• 7、參考文獻(xiàn)36-39
• 附錄39-48
• 1、個人簡歷39-40
• 2、致謝40-41
• 3、綜述41-48
• 參考文獻(xiàn)45-48

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本文編號：385571