目的:探討雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1 (mammalian target of rapamycin complex 1,m TORC1)對(duì)Hela細(xì)胞微管穩(wěn)定性的影響及可能機(jī)制。方法:使用50 nmol/L雷帕霉素預(yù)處理Hela細(xì)胞24 h后,加入5μmol的諾考達(dá)唑處理30、60和120 min,免疫熒光檢測(cè)微管蛋白的穩(wěn)定性;使用50 nmol/L雷帕霉素處理Hela細(xì)胞24 h后,蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)促微管解聚蛋白stathmin、KIF2A,促微管聚合蛋白CLIP170,微管切割蛋白Katanin、Spastin的表達(dá)變化。轉(zhuǎn)染ATG5-shRNA抑制自噬相關(guān)基因5(autophagy-related gene5,ATG5)后,免疫熒光檢測(cè)微管蛋白穩(wěn)定性的改變。使用50 nmol/L雷帕霉素預(yù)處理Hela細(xì)胞24 h后,蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)Ras同源基因家族成員A(Ras homolog gene family member A,Rho A)的表達(dá);轉(zhuǎn)染GFP Rho A-Q63L或GFP Rho A-N19、p190RhoGAP-siRNA質(zhì)粒后,免疫熒光檢測(cè)微管穩(wěn)定性的改變。結(jié)果:用雷帕霉素...

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 免疫熒光檢測(cè)雷帕霉素處理后Hela細(xì)胞的微管穩(wěn)定性
    1.4 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)雷帕霉素處理后Hela細(xì)胞微管穩(wěn)定性相關(guān)蛋白的表達(dá)
    1.5 免疫熒光檢測(cè)ATG5敲減后Hela細(xì)胞的微管穩(wěn)定性
        1.5.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        1.5.2 蛋白質(zhì)印跡驗(yàn)證ATG5的干擾效率
        1.5.3免疫熒光檢測(cè)微管穩(wěn)定性
    1.6 免疫熒光檢測(cè)RhoA在m TORC1調(diào)節(jié)微管穩(wěn)定性中的作用
        1.6.1 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)雷帕霉素處理后Hela細(xì)胞RhoA的表達(dá)
        1.6.2 RhoA活化實(shí)驗(yàn)
        1.6.3 RhoA抑制實(shí)驗(yàn)
    1.7 免疫熒光檢測(cè)p190RhoGAP在m TORC1調(diào)節(jié)微管穩(wěn)定性中的作用
2 結(jié)果
    2.1 雷帕霉素作用后Hela細(xì)胞微管的穩(wěn)定性
    2.2 霉帕霉素作用后Hela細(xì)胞微管穩(wěn)定性相關(guān)蛋白的表達(dá)
    2.3 ATG5基因敲低后Hela細(xì)胞的微管穩(wěn)定性
    2.4 Rho A活性在m TORC1調(diào)節(jié)微管穩(wěn)定性中的作用
    2.5 p190RhoGAP在m TORC1調(diào)節(jié)微管穩(wěn)定性中的作用
3 討論



本文編號(hào)：3846853