本文關(guān)鍵詞：宿主限制因子BST-2和乙型肝炎病毒相互作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：宿主限制因子BST-2是一種由干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗病毒糖蛋白，自2008年人們發(fā)現(xiàn)BST-2對HIV-1的限制作用以來，BST-2的研究成為了生命科學(xué)領(lǐng)域的一大熱點。BST-2的主要作用是將包膜病毒截留在感染細(xì)胞膜表面抑制病毒的釋放。乙型肝炎病毒（HBV）是嗜肝病毒科的一種包膜DNA病毒，在細(xì)胞內(nèi)的多囊泡體進行組裝分泌。HBV能引起人類肝臟的急慢性感染和肝臟炎癥，發(fā)展為肝硬化，同時也是肝細(xì)胞癌的一個主要因素。最近有研究報道BST-2還可以影響HIV-1病毒在細(xì)胞內(nèi)部的組裝釋放，和HBV的組裝位置相同，而且BST-2對HBV的釋放是否有抑制作用尚不清楚。所以，我們設(shè)計實驗對BST-2與HBV之間的相互作用進行了研究。 通過總結(jié)目前的研究進展，本實驗的設(shè)計主要包括四個方面，第一是BST-2及其突變體對HBV釋放的抑制作用，第二是不同細(xì)胞中HBV對BST-2的拮抗作用，第三是HBx與BST-2的相互作用，最后還研究了HBx和BST-2對NF-κB信號通路的調(diào)節(jié)。通過對實驗數(shù)據(jù)的分析，我們得到了一些明確的實驗結(jié)果。 在本研究中，向肝細(xì)胞和非肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)染HBV病毒質(zhì)粒，通過western blot檢測蛋白表達量，并且通過ELISA檢測HBV抗原。結(jié)果表明BST-2與HBV的相互作用具有細(xì)胞依賴性。在293T細(xì)胞中，，IFN-α誘導(dǎo)產(chǎn)生的和轉(zhuǎn)染的BST-2對HBV都有很強的抑制作用，但是在Huh-7細(xì)胞中，外源的BST-2對HBV的抑制作用較弱。在肝細(xì)胞中，通過HIV-1ΔVpu與HBV或者病毒蛋白質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，并超速離心收集上清中的HIV-1病毒顆粒進行western blot檢測，我們發(fā)現(xiàn)HBV和HBx能促進HIV-1ΔVpu的釋放，而在非肝細(xì)胞中則沒有促進釋放的現(xiàn)象，而且Vpu不能有效地恢復(fù)BST-2對HBV的抑制作用。部分BST-2突變體對HBV和HIV-1的限制作用也不相同。這些結(jié)果說明HBV和HIV-1對BST-2的拮抗作用不完全相同。通過向293T細(xì)胞共轉(zhuǎn)染HBx和BST-2質(zhì)粒，使用western blot檢測細(xì)胞中蛋白的量，我們觀察到BST-2被HBx降解。在質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染后，加入蛋白酶抑制劑，降解作用則受到抑制。在肝細(xì)胞中沒有觀察到降解現(xiàn)象，反而是HBx引起了BST-2在肝細(xì)胞內(nèi)的積聚，總體BST-2的水平升高。這些結(jié)果表明HBx和BST-2之間的相互作用也是肝細(xì)胞特異性的。之前的研究報道BST-2和HBx能分別激活NF-κB信號通路，在本研究中，向肝細(xì)胞和非肝細(xì)胞轉(zhuǎn)染了NF-κB報告質(zhì)粒,通過檢測螢光素酶活性，表明了在肝細(xì)胞和非肝細(xì)胞中BST-2都能激活NF-κB信號通路，但是在肝細(xì)胞中HBx對NF-κB信號通路的激活不明顯，在非肝細(xì)胞中作用較弱。 雖然BST-2抑制HBV釋放及其之間相互作用的機制尚不清楚，還需要大量的研究來進一步地闡明，但是我們的研究已經(jīng)得到了一些初步數(shù)據(jù)，表明二者之間有一定的聯(lián)系，這可能會開啟宿主細(xì)胞抗HBV研究的新領(lǐng)域，為HBV的臨床治療提供新的藥物作用靶點。
【關(guān)鍵詞】：BST-2 乙型肝炎病毒 HBx NF-κB 干擾素
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373.21
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第1章 前言9-23
• 1.1 BST-2 的研究現(xiàn)狀9-13
• 1.1.1 BST-2 的發(fā)現(xiàn)及其結(jié)構(gòu)9-10
• 1.1.2 BST-2 的抗病毒功能10-12
• 1.1.3 Vpu 對 BST-2 的拮抗12-13
• 1.2 乙型肝炎病毒的研究簡介13-19
• 1.2.1 HBV 簡介14-18
• 1.2.2 HBV 的復(fù)制周期18-19
• 1.2.3 HBV 感染受體 NTCP 介紹19
• 1.3 NF-κB 信號通路介紹19-21
• 1.3.1 BST-2 調(diào)節(jié) NF-κB 信號通路的研究20-21
• 1.3.2 HBV 與 NF-κB 信號通路的研究21
• 1.4 研究目的與設(shè)計方案21-23
• 1.4.1 研究目的21
• 1.4.2 實驗設(shè)計21-23
• 第2章 實驗材料與方法23-31
• 2.1 實驗材料與試劑23-25
• 2.1.1 工具酶23
• 2.1.2 實驗試劑23-24
• 2.1.3 試劑盒24
• 2.1.4 抗體24
• 2.1.5 細(xì)胞和菌種24
• 2.1.6 溶液配制24-25
• 2.2 實驗儀器25
• 2.3 實驗方法25-31
• 2.3.1 質(zhì)粒構(gòu)建25-28
• 2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染28
• 2.3.3 蔗糖墊超速離心法收獲病毒28
• 2.3.4 流式細(xì)胞術(shù)28-29
• 2.3.5 蛋白電泳與免疫印跡29
• 2.3.6 穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建及檢測29
• 2.3.7 ELISA29-30
• 2.3.8 螢光素酶分析法檢測 NF-κB 活性30
• 2.3.9 Trizol 法提取細(xì)胞總 RNA30
• 2.3.10 逆轉(zhuǎn)錄 PCR30-31
• 第3章 實驗結(jié)果與討論31-52
• 3.1 BST-2 對 HBV 釋放的抑制作用31-48
• 3.1.1 BST-2 對 HBV 釋放的抑制作用31-36
• 3.1.2 BST-2 突變體對 HBV 的抑制作用36-38
• 3.1.3 HBV 拮抗 BST-2 的機制可能與 HIV-1 不同38-44
• 3.1.4 IFN-α和 LPS 誘導(dǎo)的 BST-2 抑制 HBV 的作用44-46
• 3.1.5 HBV 感染模型的建立46-48
• 3.2 HBV 對 BST-2 功能調(diào)控作用48-52
• 3.2.1 HBV X 蛋白與 BST-2 的相互作用48-50
• 3.2.2 HBV X 蛋白對 BST-2 介導(dǎo)的 NF-κB 信號通路的調(diào)節(jié)50-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-61
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果61-62
• 致謝62

【共引文獻】

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本文編號：383312